G蛋白偶联受体研究进展.ppt

大多数的GPCRs激活后,在第二信使激酶或G蛋白偶联受体激酶的作用下发生快速磷酸化;受体的磷酸化提高了其对arrestin(阻碍蛋白)的亲和力,两者形成复合体并促使受体与G蛋白解偶联;进而此复合体与笼形蛋白衣被小泡结合并在dynamin(发动蛋白)的调解作用下发生内吞,并隐没(sequestration)于胞内。 内吞后的受体可能发生两种变化:一是在衣被小泡内发生去磷酸化,通过再循环回到胞膜表面,完成复敏(resensitization);二是受体被降解,发生下调。 但是有些受体在此过程中并不需要arrestin和dynamin的介导,如血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体。 医学资料 * GPCRs ＋GP internalization down-regulation arrestin GPCRs ＋arrestin GP resensitization dynamin enzyme 医学资料 * ①与受体磷酸化相关的激酶 GPCRs被配体激活后,在激发下游信号转导通路的同时,GPCRs本身也会发生快速的磷酸化,作用于受体的蛋白激酶家族已知有两种: 第二信使激酶：包括cAMP依赖的蛋白激酶(PKA)、蛋白激酶C(PKC)等,其中PKA主要作用于Gs偶联受体,而PKC则作用于Gq偶联受体; GPCRs激酶(G protein-coupled receptor kinases, GRKs)：主要作用于经典的信号反馈调节通路,介导第二信使系统间的相互对话。 GRKs有六种:视紫红质激酶(GRK2)、肾上腺素受体激酶(βGRKs)的两种异型体(GRK1和GRK3)、遗传性慢性舞蹈病患者4号染色体中克隆出的IT11(GRK4、GRK5)以及一些从果蝇中克隆的多种同源物. 医学资料 * ②受体磷酸化激酶的作用机制 视紫红质激酶和β-肾上腺素受体激酶存在于胞质中,但它们的作用底物却在胞膜上,因此,他们发挥作用时必须由胞质向胞膜发生移位(translocation)。 视紫红质激酶发生移位的主要机制：其C末端的Cys发生异戊二烯化(isoprenylation),使得C末端水解,最终导致激酶由胞质向胞膜移位。如将C末端的Cys点突变为Ser,异戊二烯化被阻断,视紫红质激酶的作用随之降低。 β-肾上腺素受体激酶的移位机制：激酶本身并不发生异戊二烯化,而是与受体相偶联的G蛋白发生异戊二烯化。受体被激活后,G蛋白的β、γ亚基可激活β-肾上腺素受体激酶,同时γ亚基也发生异戊二烯化,进而对激酶接近胞膜上的受体起易化作用。 医学资料 * ③arrestin蛋白、笼形蛋白与笼形蛋白衣被 Arrestin最重要的作用是促使激活的、磷酸化的受体与G蛋白解偶联,加速受体的失敏。 医学资料 * 内吞的可能机制 衣被复合体主要有三类:衣被蛋白I(Coat protein-I, cop-Ⅰ)、衣被蛋白Ⅱ(Coat protem-Ⅱ-,copⅡ)和笼形蛋白(clathrin)。 衣被蛋Ⅰ和衣被蛋白Ⅱ主要参与小泡在高尔基复合体和内质网之间的转运;笼形蛋白则主要参与液相物质和受体由胞膜以及反向高尔基网(transGolginet-work,TGN)向内涵体(endosome)的转运。 内吞后的受体隐没于内涵体。内涵体中的磷酸酶在酸性条件下可以特异地引起磷酸化的受体去磷酸化,进而使得受体复敏并再循环至胞膜重新发挥作用。 这一过程与受体的失敏和内吞一样,G蛋白受体激酶,arrestin和笼型衣被小泡起到至关重要的作用。 医学资料 * GPCRs的活化模式 1. 二态模式 受体处在非活性构象(R)与活性构象(R*)的平衡之中,即R?R*。 在没有激动剂的情况下,R占绝大多数,R和R*之间的能障很低,使一部分R自发地变成R*。 激动剂与R*有很强的亲和力,使平衡发生移动,增加R*的比例。 拮抗剂能稳定R,使平衡从R*移向R。 中性拮抗剂与R及R*有相同的亲和力,因此不能改变平衡。 医学资料 * 2. 多态模式 受体自发地在多个活性和非活性构象之间变化,因而配体引起的生物效应取决于配体高亲和力结合的受体构象。 如果与G蛋白偶联的受体构象是活性的,那么该配体则作为激动剂； 如果受体的构象是非活性的,则配体作为拮抗剂与受体结合。 医学资料 * 3. “顺序结合和构象选择”模式 受体自发地在不同的构象(非活性R和活性R*)之间转变,激动剂不是一步直接与R*结合,而是按一定顺序结合,因此在R和R*之间产生了一系列的中间构象(R′和R)。 R →R′→ R→… → R* 开始,激动剂的一个结构基团与受体相互作用,然后TM的结构域自发地运动,激动剂的其他基团按顺序地与受体作用,每一次相互作用稳定了一个或多个跨膜结构域,最终激动剂稳定R*。 医学资料 * GPCR固有活性研究与新药开发 1　GPCR固有