聚合betatsvp基因义提高棉花耐盐性及共转化法获得基因聚合棉花的研究.docx

咱 |l|lllllI||IlIf |l|lllllI||IlIf 11lIl I|lfIlI|11ⅧI Y1 93627 1 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。 对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：一室垂宝一 日 期： ．型f：立=．至1 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：至叠鱼 导师签名：主亟亟兰圭 日 期：2Qi I：曼：墨I 山东人学硕十学位论文目录 山东人学硕十学位论文 目录 中文摘要 ．1 Abstract 4 符号说明 8 第一章前言 ．9 1．1植物耐盐分子机制 一9 1．2植物自身的耐盐调节 1 1 1．2．1渗透保护物质的合成 ．12 1．2．2离子区隔化及平衡调节 ．12 1．2．3活性氧清除维持膜系统的完整性 一13 1．2．4逆境诱导蛋白的生成 ．14 1．2．5激素与信号转导系统 ．．15 1．3甜菜碱合成相关的基因工程研究 l 6 1．3．1甜菜碱生物合成途径 ．16 1．3．2 6e纠基因工程研究进展 ．．18 1．3．3甜菜碱的保护作用机制 ．19 1．3．3．1渗透调节作用 20 1．3．3．2稳定和保护生物大分子的结构和功能 20 1．3．3．3保护膜完整性 21 1．3．3．4对光合系统的保护作用 ．21 1．3．3．5诱导特定基因的表达 22 1．4 H+．PPase相关基因工程的研究进展 23 1．4．1液泡膜H十．PPase的分子结构与功能 24 1．4．1．1 H+．PPase的分子结构 24 1．4．1．2 H十．PPase的主要功能 25 1．4．2液泡膜H+一PPase与植物抗逆性 26 1．5肌醇磷脂信号系统相关研究 ．27 1．5．1肌醇磷酸信号系统简介 27 1．5．2磷脂酰肌醇合成酶相关研究 ．．30 东人。≯硕{J学何沦文1．6转基因聚合的植物基因工程研究 东人。≯硕{J学何沦文 1．6转基因聚合的植物基因工程研究 31 1．6．1实现基因聚合的策略和方法 一31 1．6．2耐逆相关基因聚合的研究进展 ．．34 1．7棉花基因工程研究现状 36 1．8本工作的目的和意义 36 第二章聚合抛￡4仿阡基因提高棉花耐盐性的研究 38 2．1材料与方法 38 1 2．1．1实验材料 ．．38 2．1．1．1植物材料 38 2．1．1．2有性杂交获得转基因聚合植株 38 2．1．2聚合6比4／乃阡基因植株的PCR检测 ．．38 2．1．3棉花RNA提取及Realtime RT．PCR 39 2．1．4聚合6P纠／乃牌基因棉花的耐盐性分析 4l 2．1．4．1棉花苗期盐胁迫处理 41 2．1．5棉花叶片甜菜碱含量测定 ．．42 2．1．6棉花液泡膜的分离及液泡膜ATPase和H+．PPase活性测定 一42 2．1．7棉花叶片相对含水量的测定 ．．43 2．1．8棉花叶片叶绿素含量的测定 一43 2．1．9棉花叶片光合作用和叶绿素荧光参数的测定 ．．43 2．1．10棉花叶片渗透势的测定 44 2．1．11棉花叶片离子渗漏率和丙二醛含量的测定 44 2．1．12 Na+、K+离子含量测定 ．．44 2．1．13抗氧化酶活的测定 44 2．2结果与分析 45 。 2．2．1 6P纠和乃阡转基因聚合棉花的获得 45 2．2．2盐胁迫对棉花叶片甜菜碱含量的影响 ．．47 2．2．3液泡膜H+．PPase和H+．ATPase酶活性变化 ．47 2．2．4盐胁迫处理对目的基因表达变化的影响 ．48 2．2．5盐胁迫对棉花叶片离子含量的影响 ．49 Il』东大学硕十学何论文2．2．6盐胁迫对棉花叶片相对含水量和渗透势的影响 Il』东大学硕十学何论文 2．2．6盐胁迫对棉花叶片相对含水量和渗透势的影响 ．50 2．2．7盐胁迫对棉花叶片叶绿素含量的影响 ．5l 2．2．8盐胁迫对棉花叶片光合作用及叶绿素荧光参数的影响 ．52 2．2．9盐胁迫对棉花叶片膜损伤的影响 ．．53 2．2．10盐胁迫对棉花叶片抗氧化酶活性影响 ．54 2．2．11盐胁迫对植株生物量的影响 56 2．3讨论 56 第三章共转化法转基因聚合棉花的获得 59 3．1材料与方法 59 3