同源重组法构建多功能农药降解基因工程菌探究.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( )! *’ )# 年 月 !$$% !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *’+,-.,/ !$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 同源重组法构建多功能农药降解基因工程菌研究 !#$%’(%)# * +’,%)*’#(%)#-, ./#/%)(-,,0 1#2)#///3 4/$%)()3/$53/2-3)#2 6-(%/)- 70 89,2’$ :/(97)#-%)# 蒋建东，顾立锋，孙纪全，代先祝，文 阳，李顺鹏 ， ， ， ， 4W8*X 42A6QI’6B XY Z2QD,6B HY* 42Q[5A6 I8W \2A6Q]=5 ^T* EA6B A63 ZW H=56QG,6B 南京农业大学生命科学学院，农业部农业环境微生物工程重点开放实验室，南京 !$$S% !(,,%1% (- 3#- % 40#%$0% ，5%2 3+6(*+/(*2 - (* 7#0*(6#(,(1#0+, 8$1#$%%*#$1 (- 91*#0),/)*+, 8$:#*($;%$/ (- 7#$#/*2 (- 91*#0),/)*% ，+$= #$1 91*#0),/)*+, $#:%*#/2 ， +$= #$1 !$$S%，!#$+ 摘 要 构建遗传稳定的多功能农药降解基因工程菌可以为农药污染的生物修复提供良好的菌种资源，然而，构建遗传稳定 且不带入外源抗性的基因工程菌是一个难点。通过以受体菌的 为同源重组指导序列、 基因为双交换正筛选标 #H /I*8 +0. 记构建同源重组载体，二亲结合的方法将甲基对硫磷水解酶基因（ ）整合到呋喃丹降解菌 染色体的 ;? @ 4?#$1(;($+ 9 ) JIHQ 位点，分别成功构建了含 个和 个 基因插入到 位点且不带入外源抗性的基因工程菌株 和 #H /I*8 ! ;? @ /I*8 JIHQ-93 JIHQ !-93。同源重组单交换的效率为R _7 ‘ $ a 7 b # _P ‘ $ a 7 。通过GJ0 和 H’5:=,/6 杂交的方法验证了同源重组事件。基因工程 菌遗传稳定，能同时降解甲基对硫磷和呋喃丹。甲基对硫磷水解酶（ ）的比活在各生长时期均高于原始出发菌株，比活最 cGM 高达# _!! -5N