中间锦鸡儿fad2基因片段克隆反义表达载体构建及-林业科学研究.PDF

林 业 科 学 研 究　2007, 20 ( 1) : 6 ～9 F ores t R esea rch 　　文章编号 : 100 11498 (2007) 0 1000604 中间锦鸡儿 f ad2基因片段克隆、反义表达载体 构建及遗传转化初步研究 1, 2 1 1 1 汪阳东 , 李春秀 , 齐力旺 , 张守攻 ( 1. 中国林业科学研究院林业研究所 , 国家林业局林木培育重点实验室 ,北京 　10009 1; 2. 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 ,浙江 富阳　3 11400) 摘要 : 以我国重要的生物能源灌木 ———中间锦鸡儿枝叶和种子为材料 ,根据 GenB ank 中已经发表 f ad2 基因的同源 ( ) 序列 ,利用 PCR 技术克隆得到基因片段 。在 GenB ank 中 B la st GenB ank 登录号 A Y957393 所得基因片段和同属豆 科的 Glycine m ax Gmf ad2 2a 同源性高达 88% ,位于 f ad2基因编码区中部 。将所得片段经 B amH I和 Sac I酶切后插 入表达载体质粒 pB I12 1,构建了反义表达载体 pB I12 1f ad2 ,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片 ,获得了抗卡那霉素 和氨苄青霉素的再生烟草植株 。初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异 , 而亚油酸则减少 10. 3% 。 关键词 : 中间锦鸡儿 ;生物柴油 ;f ad2基因;反义表达载体 ;遗传转化 中图分类号 : Q75 文献标识码 : A C lon ing of fa d2 Gene Fragm en ts from C a ra gan a in term ed ia, Con structing of An isence fa d2 Expression Vector and Its Genetic Tran sform a tion in Tobacco 1, 2 1 1 1 WAN G Yang dong , L I Chun x iu , Q I L iw ang , ZHAN G S houg ong ( 1. R esearch In stitu te of Forestry, CA F; Key L aboratory of Tree B reeding and Cu ltivation , state Forestry A dm in istration , B eij ing　10009 1, Ch ina; 2. R esearch In stitu te of Sub trop ical Forestry, CA F, Fuyang　3 11400 , Zhej iang, Ch ina) Abstract: △12 fatty acid de satu rase is an important enzym e in the route of p roduction of p