FACSAriaⅡ中文操作手册FACSAriaⅡ流式细胞仪培训安排（一）培训.docVIP

FACSAriaⅡ中文操作手册 PAGE 17 FACSAriaⅡ流式细胞仪培训安排 （一）培训需要准备的物品 超声波清洗仪 FACSClean(或漂白水)3-5L 无菌蒸馏水5L 75%酒精5L 无菌PBS或生理盐水5-10L （二）FACSAriaⅡ 日常运作需要的质控品 Rainbow Beads(QC需要)：货号556291 Comp Beads（调整补偿）：货号552843/552844 Accudrop beads（分选时液滴延迟校准）：货号345249 Cytometer setup and tracking beads（QC）(7.0)：货号655050/655051 （三）装机培训安排 1．目的：了解流式细胞仪原理和结构，掌握仪器的开/关机和日常保养维护，熟悉FACSDiva软件基本的功能，能独立完成数据采集及分析；能独立完成分选过程 2．培训时间安排： 第一天： 流式细胞仪原理及结构介绍（FACSAriaⅡ） FACSAriaⅡ 开机/关机，日常保养及维护 FACSAriaⅡ 流式细胞仪软件介绍，动手练习 第二天： 样本制备 数据采集和分析 第三天： FACSAriaⅡ 分选过程介绍及演示 FACSAriaⅡ 分选练习 FACSAriaⅡ 流式细胞仪组成 流式细胞仪 液流车 工作站 液流车流式细胞仪工作站 液流车 流式细胞仪 工作站 每日开机 （一）准备液路 将流式细胞仪的上盖打开； 开启计算机，等待所有程序载入。 开主机电源Mainpower，从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。如果仪器刚关机，等压力完全降下来后再开启。打开激光开关laser power；开启实验所需激光器电源。 确认液流车中各种液体的液面水平，倒空废液或加满其他液体。 从软件的Cytometer菜单上选择Fluidic Startup，点击OK确认。将出现如下窗口： 6．确认将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done； 7．确认Closed-loop Nozzle插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中； 8．移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done； 9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）； 10．然后点OK，完成整个过程； 11．从菜单上选择Sort?sort setup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。 （二）开液流 打开液流窗口的液流； 点击软件界面上的按钮 打开分选液流窗口 点击分选液流窗口的按钮，开启液流 打开分选仓前的门，检查液流。液流应为一条细线落入废液槽中； 如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。 关上分选仓前的门。 （三）设定液流断点 调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适； 确认卫星液滴与大液滴融合，如果没有融合，重新安装喷嘴；应该在断滴的6滴之内融合； 每日关机和日常维护 （一）日常关机 1．关闭液流 2．取下喷嘴，装上Closed Loop Nozzle。 3．从菜单上选择Cytometer Cleaning Modes Clean Flow Cell，会弹出右侧窗口： 放一管无菌水在上样台上。 4．完成后，按要求点击OK； 5. 用超纯水清洗Closed Loop Nozzle。 6．关闭流式细胞仪主机电源； 7．退出 FACSDiva软件，关电脑。 （二）液流关机 当样本种类较多，或怀疑有污染时，该过程可完成深入清洗。 预备关机 1．关激激光电源； 2．从上样架上移去上样管； 3．关闭液流； 4．倒空废液桶； 5．加满酒精桶 关机 1．从菜单上选择Cytometerfluidics shutdown，会弹出下面窗口 2．从流动室上移去喷嘴；完成后点Done。 3．插入Closed-loop喷嘴，完成后点Done。 4．将鞘液桶的液流管和气管分别连接到酒精桶上，点Done。 鞘液桶酒精桶鞘液桶酒精桶气管液流管从此处断开连接 鞘液桶 酒精桶 鞘液桶 酒精桶 气管 液流管 从此处断开连接 液路关机时正常运行时 液路关机时 正常运行时 5．按照提示，放上一管3ml清洗液，完成后点Done； 6．清洗完成后，按提示，点OK。 7．关闭流式细胞仪主机电源； 8．退出软件，关计算机。 清洗外部 用软布沾次氯酸钠和蒸馏水清洗分选仓、偏转板、上样架、分选收集架，进行消毒和避免形成盐结晶。 FACSDiva软件介绍 DIVA软件界面如