颅脑损伤对周围神经损伤修复的影响.pdfVIP

5.Masson 染色 于造模后8 周和 12 周，取神经术口两端0.5cm，切片厚度约3-5um, 染色方法参考说明书，封片，光学显微镜下观察神经外膜胶原纤维增生情 况。 6.免疫荧光染色 于造模后8 周和12 周，取神经吻合口中段神经冰冻切片，NF200 免 疫荧光染色。荧光显微镜下观察神经丝出现情况。 7.辣根过氧化物（HRP ）示踪技术 于造模后第4 、6、8、12 周时，每组取 10 只大鼠，水合氯醛腹腔注 射麻醉后，于左侧坐骨神经断端以远 0.5mm 处，轻微挫夹神经后，注入 30%HRP 溶液，72h 后深麻醉下开胸，经左心室升主动脉插管，用温生理 盐水200mL 冲洗血管，随后用含2%多聚甲醛和2%戊二醛的0.1mol/L PBS 固定液400mL 灌流固定，取坐骨神经脊神经节以及相应的T4-5 脊髓节段， 横断面连续振荡切片 50μm。行联苯胺（BDHC ）法染色，中性红复染。 光镜下观察神经节及脊髓前角运动神经元中含蓝染颗粒的胞体数量。 8.透射电镜观察 于造模后 8 周和 12 周取材，取材以神经吻合口为中心修剪成 2mm×lmm×1 mm 组织块，固定、包埋、染色，透射电镜下观察新生髓鞘 超微结构及细胞器形态。 结果： 1.颅脑损伤对周围神经损伤大鼠坐骨神经功能指数的影响 暗箱测试结果显示，造模后第4 周，2 组大鼠 SFI 接近（P0.05 ）； 从第4 周损伤组大鼠SFI 开始降低，随时间的延长降低的幅度减缓，而对 照组大鼠SFI 从第6 周开始下降；第8、12 周时，损伤组大鼠SFI 均低于 对照组 （P 0.01 ）。 2.颅脑损伤对周围神经损伤大鼠腓肠肌湿重的影响 2 组大鼠实验侧腓肠肌颜色均较健侧苍白，肌萎缩明显，且造模后4 周时2 组的大鼠腓肠肌湿重恢复率接近（P 0.05 ），而6-12 周损伤组大鼠 腓肠肌恢复率显著高于对照组 （P 0.01 ）。 3.颅脑损伤对周围神经损伤大鼠坐骨神经病理变化的影响 HE 染色显示，造模后4 周时，损伤组、对照组两组无明显差异，未 万方数据 见神经纤维通过断端，神经断端紊乱，无完整神经纤维，但可见损伤组近 端出现较多神经纤维细胞，而对照组周围大量空泡坏死细胞。6 周时，损 伤组可见神经纤维通过断端，但较少，稀疏，粗细不均，排列紊乱；对照 组未见神经纤维通过，周围空泡变性细胞仍然较多见，部分神经存在粘连， 断端以远较细。8 周时，损伤组可见较多神经纤维通过断端，粗细渐趋一 致，排列较为整齐，但神经纤维较细；对照组也可见神经纤维通过断端， 但粗细不均，排列紊乱，部分神经存在粘连，断端以远较细。12 周时， 损伤组可见通过断端神经纤维数量较多，直径较粗，排列一致，与正常纤 维无明显差异；对照组也有较多神经纤维通过断端，粗细一致，神经纤维 已呈典型的波浪状排列。 4. Masson 三色法染色 术后8、12 周，镜下均可见对照组在吻合口处胶原纤维增生明显多于 损伤组．且排列紊乱，神经纤维稀少，神经纤维走行失去波浪状结构。 5.免疫荧光染色 术后8、12 周，实验组在再生神经的密度、排列规则程度以及神经髓 鞘厚度等方面均要优于对照组，表明实验组损伤的神经得到了较快的修复 和再生，神经纤维再生的质量较高。 6. 辣根过氧化物（HRP ）示踪技术 光镜下可见，造模后第4 周时，2 组大鼠坐骨神经神经节、相应脊髓 节段前角均未发现标记成蓝黑色的神经元胞体，可见大量的肿胀细胞；6 周时，损伤组大鼠坐骨神经神经节内可见被标记的神经元胞体，对照组中 未见神经元胞体；8 周时，损伤组大鼠坐骨神经神经节、相应脊髓节段前 角内可见明显标记细胞，平均 12-15 个/视野，对照组较少，平均2-5 个/ 视野；12 周时，2 组均可