垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生多肽RHMP的重组制备及促角膜损伤修复.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（２）：６５６９ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 檪 技术与方法 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生多肽ＲＨＭＰ的重组 制备及促角膜损伤修复的初步研究  徐文娜　马　义 　叶祖禄　罗天杰　饶　磊　洪　岸 （暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心　广州　５１０６３２） 摘要　利用基因工程技术高效制备具有促进角膜损伤修复功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽 （ＰＡＣＡＰ）衍生多肽ＲＨＭＰ，并在体外研究其生物学效应，为角膜疾病的治疗提供了新思路。采用 基因重组技术表达重组肽 ＲＨＭＰ，经ＣｈｉｔｉｎＢｅａｄｓ柱纯化、ＨＰＬＣ及 ＳＤＳＰＡＧＥ、质谱鉴定后，研究 其对小鼠角膜损伤修复的影响。实验结果表明：利用基因重组技术制备的ＰＡＣＡＰ衍生多肽 ＲＨＭＰ的分子量为３．４ｋＤａ，纯度为９６％；将重组肽作用于创伤后的小鼠角膜，１２ｈ、２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ 后角膜修复率分别为（４９．５８±１．７４）％、（９３．６６±３．３９）％、（９９．６±０．４３）％、（９９．８±０．１４）％， 而对照组修复率分别为（９．７６±１．５８）％、（２９．０２±１．６３）％、（５５．１０±１．４９）％、（７８．５９± ２．５２）％，Ｐ＜０．００１，差异具有统计学意义，重组肽 ＲＨＭＰ可显著促进小鼠角膜损伤修复。因此， 利用以上确立的表达、纯化策略，可实现新型基因重组ＰＡＣＡＰ衍生多肽 ＲＨＭＰ的高效制备，重组 多肽ＲＨＭＰ可快速有效地促进损伤角膜的修复，从而有望成为一种新型角膜损伤治疗药物；同 时，建立的小鼠角膜上皮损伤模型可用于相关药物的生物学效应研究。 关键词　基因重组　垂体腺苷酸环化酶激活肽　重组肽　角膜损伤修复 中图分类号　Ｑ８１９ 　　垂体腺苷酸环化酶激活肽（ｐｉｔｕｉｔａｒｙａｄｅｎｙｌａｔｅ 类受体在人及动物体中的分布和功能均不同。ＰＡＣＡＰ ｃｙｃｌａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＰＡＣＡＰ）是近年新发现的 及其受体不仅分布在中枢神经系统和周围神经系统， 神经肽。已经发现它具有重要的生物学功能，是促胰 ［３］ 而且在周围组织和器官也广泛分布 。 液素／胰高血糖素／血管活性肽（ＶＩＰ）家族中的新成 　　大量实验证明ＰＡＣＡＰ对眼部各组织有复杂的作 ［１２］ 员 。ＰＡＣＡＰ在体内有两种存在形式：ＰＡＣＡＰ３８及 用。在眼部，ＰＡＣＡＰ及其受体主要分布在角膜、虹膜、 ＰＡＣＡＰ２７，二者具有相似的生物学活性。ＰＡＣＡＰ有三 ［４］ 睫状神经节、脉络膜、视网膜等 。ＰＡＣＡＰ不仅作为一 类特异的Ｇ蛋白偶联受体：ＰＡＣ１、ＶＰＡＣ１和ＶＰＡＣ２，三 种神经递质／调质其作用，还作为一种神经营养因子在 ［５］ ［６］ 神经系统的发育中起到重要作用 。Ｗａｎｇ等 研究 收稿日期：２０１２０９０４　　修回日期：２０１２１２１８ 发现ＰＡＣＡＰ在眼表炎症反应中作为感觉神经递质，对 国家“８６３”计划（２００６ＡＡ０２Ｚ１２５）、科技部科技型中小企业技术 创新基金（１１Ｃ２６２１４４１３２１８）、中央高校基本科研业务费专项资金 Ｃｆｉｂｒｅｓ释放炎症因子起正反馈调节作用。大量实验表 、高 等 学 校 博 士 学 科 点 专 项 科 研 基 金 明ＰＡＣ１在介导神经系统的发育和保护方面起重要作 （２０１２４４０１１２００１２）