阿勒泰大尾羊fto基因表达的时空特异性及其与脂肪沉积的相关性研究兽医专业论文.docxVIP

本文是国家科技支撑计划课题 本文是国家科技支撑计划课题 “肉牛生产质量监测关键技术研发与示范” (项目编号：2011BAD47804) 课题主持人：姚刚教授 新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目 “脂肪和肥胖相关基因与阿勒泰大尾羊脂肪沉积相关性的 研究”的部分研究成果 (项目编号：2011211A026) 课题主持人：王金泉副教授 (新疆农业大学) 万方数据 阿勒泰大尾羊FTO基因表达的时空特异性 阿勒泰大尾羊FTO基因表达的时空特异性 及其与脂肪沉积的相关性研究 摘要 新疆肉用绵羊多为脂臀型品种，虽肉用性能良好，但尾脂过大，有些品种的尾脂甚至占体重的 17％以上。如何降低尾脂而又不影响肌内脂肪含量，一直是困扰新疆绵羊优良肉质性状，种质资源 利用的关键问题，而解决的关键是深入了解绵羊体内各部位脂肪沉积规律的差异及相关调节因子表 达变化，探索这些差异形成的机理。脂肪和肥胖相关基因(Fat and obesity associated gene，FTO) 是第一个与普通肥胖相关的基因，与脂肪沉积和代谢相关激素及基因的表达有关，且在肌肉和脂肪 的表达差异显著。目前，绵羊FTO基因表达的时空特异性及与脂肪沉积相关性研究鲜为报道。本试 验以雄性阿勒泰大尾羊为研究对象，研究其不同部位FTO基因表达和脂肪沉积发育性规律的差异及 相关性，同时测定与脂肪代谢相关激素和基因表达的水平；探索FTO基因和主要调节因子与脂肪沉 积的关系。 I．不同部位脂肪细胞形态的研究 为了研究阿勒泰大尾羊不同部位脂肪组织沉积的变化规律，分别采集了90日龄时肾周脂和尾脂 组织样品及270日龄时肾周脂、尾脂、皮下脂组织样品，采用改进的冰冻脂肪组织切片油红O滴染 技术，运用Motic显微数字图像处理系统，测定脂肪组织面积。本试验研究结果显示：90日龄阿勒 泰羊尾脂脂肪细胞面积极显著高于同日龄阿勒泰大尾羊肾周脂脂肪细胞面积(P0．01)，270日龄时 尾脂和皮下脂肪细胞面积都极显著高于肾周脂(PO．01)，但脂肪细胞的面积在尾脂和皮下脂肪之 间无显著差异。从90日龄至270日龄时，肾周脂细胞面积呈增加的趋势，而尾脂细胞的面积呈减少 的趋势。 2．月旨代谢相关酶和激素的测定 为研究90日龄和270日龄阿勒泰大尾羊血脂指标和脂肪沉积的关系，采用放射性免疫和酶联免 疫法，测定了血清中7种酶和9种激素生理生化指标。本试验研究结果：阿勒泰大尾羊90日龄瘦素 极显著高于270日龄(P0．01)；阿勒泰大尾羊90日龄谷草转氨酶、谷酰转氨酶的浓度极显著地低 丁．270日龄(P0．01)；阿勒泰大尾羊90日龄激素敏感酯酶的浓度显著地高于270日龄(P0．05)。 3．FTO基因表达与脂肪沉积的关系 为了研究阿勒泰大尾羊FTO基因表达的时空特异性及其与脂肪沉积的相关性。采用荧光定量 万方数据 PCR与蛋白免疫印迹方法，测定了各组织与不同部位脂肪组织中FTO PCR与蛋白免疫印迹方法，测定了各组织与不同部位脂肪组织中FTO mRNA和蛋自表达水平。结果 显示：FTO基因在下丘脑、海马、心肌背最长肌、心肌、肾脏、肝脏、海马和垂体中都有表达。90 日龄阿勒泰大尾羊下丘脑中FTO mRNA表达水平极显著高于各部位脂肪组织。90日龄阿勒泰大尾 羊FTO mRNA在海马中表达水平最高，其次是垂体，并且极显著高于背最长肌、心肌、肾脏、肝脏 等组织的表达水平(P0．01)。270日龄时与90日龄时FTO基因在各器官中的表达丰度趋势基本一 致，但在肾脏和肝脏中FTO mRNA表达水平极显著低于背最长肌(P0．01)，海马和垂体中的表达 水平极显著高于背最长肌(尸O．01)。90日龄阿勒泰大尾羊尾脂FTO mRNA表达水平与肾周脂、心 周脂的无显著差异。然而在270日龄，尾脂中FTO mRNA的表达水平显著高于肾周脂、心周脂和皮 下脂肪(尸O．05)。270日龄脂肪组织中FTO蛋白的表达检测显示，尾脂同样显著高于肾周脂和皮 下脂肪的(尸0．05)。 4．FTO蛋白在各脂肪细胞中的定位 为进一步确定FTO蛋白在脂肪细胞中的定位，对阿勒泰大尾羊不同部位脂肪组织脂肪细胞应用 免疫荧光组织化学技术以及激光共聚焦显微镜技术观察FTO蛋白的定位。结果显示：FTO蛋白在肾 周脂和尾脂脂肪细胞膜内侧边缘及胞质中出现。 结论： 1．阿勒泰大尾羊不同部位的脂肪细胞面积存在时空差异性，尾脂的脂肪细胞面积高于其他部位 的脂肪组织．270日龄较90日龄尾脂脂肪细胞面积有减少的趋势，而其他部位脂肪组织随着日龄的 增长，细胞面积也逐渐增加。 2．不同日龄的阿勒泰大尾羊血清中瘦素、谷草转氨酶、谷酰转氨酶、激素敏感酯酶浓度存在差 异性。 3．FTO mRNA和蛋白在阿勒泰大尾羊不同日龄的各组织存在时空特异性，在270曰龄时尾脂中 FTO