tat介导的磁性纳米脂质体对脊髓损伤区域靶向分布的实验研究临床医学;外科学骨科专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 【目的】 探讨一种FITC标记TAT介导的磁性纳米脂质体的制备和表征，在体外与雪 旺细胞共培养的透膜能力；同时观察其在大鼠脊髓损伤后在脊髓组织局部聚集 的情况，研究其对损伤大鼠脊髓分布的靶向性，为将来该脂质体介导药物治疗 脊髓损伤确定提供实验依据。 【材料与方法】 本实验采用反相蒸发法制备兼具跨膜、长循环功能及包覆疏水性超顺磁性 Fe304颗粒的TAT磁性纳米脂质体，透射电镜，粒径仪和Zeta电位仪测定脂质 体粒径和基本表征。 通过结扎Wistar成年大鼠单侧隐神经激活雪旺细胞，采用双酶消化组织块 法结合机械分离法分离培养雪旺细胞；应用低浓度胶原酶、胰酶快速消化法和 差速贴壁法纯化雪旺细胞。用S．100抗体、DAPI染色来鉴定雪旺细胞的纯度。 将雪旺细胞分别与外接TAT磁性纳米脂质体及未接TAT磁性纳米脂质体共孵 育，对照组加入未接TAT的磁性纳米脂质体(59ptg／m1)0．5ml：实验组加入外接 TAT的磁性纳米脂质体(591xg／m1)0．5ml，5％C02，37℃共孵育1小时，在荧光 显微镜下观察雪旺细胞对脂质体的摄取情况。 本实验采用雌性Wistar大鼠16只，用IMPACTOR MODEL．II打击器建立 T10脊髓损伤(spinal eord injury，SCI))模型(109x25mm)。造模成功后随机分 为2组，分别于24小时通过尾静脉注射FITC标记的磁性纳米脂质体(1mg／kg)， 对照组注射未接TAT的磁性纳米脂质体，实验组加入外接TAT的磁性纳米脂质 体注射后1小时处死大鼠，取出脊髓组织作51xm快速冰冻切片，在荧光显微镜 下观察脂质体在脊髓组织中的聚集情况，同时取大鼠肝脏、脾脏、肾脏作冰冻 切片并在荧光显微镜下观察脂质体被其它器官摄取情况。 成年雌性Wistar大鼠16只，随机分为两组，对照组未作脊髓损伤处理，仅 采取相同剂量进行麻醉，实验组建立脊髓损伤模型，两组动物均在尾静脉途径 注射外接TAT的磁性纳米脂质体(1mg／kg)，实验组时间点选取为伤后24小时， 对照组为麻醉后24小时加制作模型所需时间。注射后1小时处死大鼠，取出脊 髓组织作5txm快速冰冻切片，在荧光显微镜下观察脂质体在脊髓组织中的聚集 情况。 天津医科大学硕士学位论文【结果】 天津医科大学硕士学位论文 【结果】 1．磁性脂质体呈球形，分散性较好，粒径较小，Zeta电位较高，外接TAT 组与未接TAT组粒径及Zeta电位无明显差别。 2．激活态雪旺细胞经分离、培养、纯化后，细胞生长旺盛。传至第4代时， 低倍镜下几乎不见成纤维样细胞。雪旺细胞纯度达到95％以上。 3．细胞摄取实验外接TAT的脂质体更多的聚集在雪旺细胞内部，并大多聚 集在细胞核周围，而未接TAT的脂质体较少进入雪旺细胞，比较二者的镜下FITC 荧光的平均光密度(average optical density，AOD)，二者具有统计学差异。 4．在荧光显微镜蓝色荧光激发下，FITC使磁性纳米脂质体呈现绿色荧光。 在大鼠损伤脊髓组织中，外接TAT的脂质体更多的聚集在损伤脊髓周围，神经 元细胞的胞浆中存在大量的荧光颗粒，聚集成片状显现出对核的趋向性，而未 接TAT的脂质体则较少分布于受损脊髓。计算二者AOD值，结果具有统计学意 义。 5．在荧光显微镜蓝色荧光激发下，未接TAT组的肝、脾、肾脏中均可见明 亮的绿色荧光，外接TAT组绿色荧光相对较弱。 6．在荧光显微镜蓝色荧光激发下，正常大鼠脊髓组织中绿色荧光较少，而 脊髓损伤大鼠的脊髓中聚集了大量的绿色荧光，计算二者AOD值，结果具有统 计学意义。 【结论】 本研究证明了TAT介导的脂质体可大量进入受损脊髓，进入神经元细胞， 并且具有靶向聚集受损脊髓组织的特性，为其成为装载治疗脊髓损伤药物的载 体提供了可行性依据。 关键词：脊髓损伤磁性纳米脂质体TAT雪旺细胞靶向性 II Abstract[Objective]Explore Abstract [Objective]Explore the FITC—TAT-mediated magnetic liposomes and character- 一ization bioeompatibility of FITC labeled TAT-PEG magnetic cationic liposomes with Schwalm cells in vitro，and analyze its ability to through the membrane by CO—culture of Schwann cells in vitro，observe the local gathering in the rat spi