基因工程 及其 应用.pptVIP

基因工程及其应用 所以，基因工程的操作包含以下步骤： ? 获得目的基因 ? 构造重组 DNA 分子 ? 转化或转染 ? 表达 ? 蛋白质产物的分离纯化 基因工程依赖于三大理论发现和三大技术发明 理论发现 生物的遗传物质是DNA DNA的双螺旋结构和半保留复制 遗传信息的传递方式-中心法则 技术发明 工具酶-DNA的手术刀和缝纫机 载体-大量表达 逆转录酶-真核基因的制备 工具酶-进行体外DNA切割连接的工具核心技术 限制性核酸内切酶： 识别DNA分子的特定碱基序列 DNA连接酶： 参与DNA裂口的修复 T4DNA连接酶 载体-具有自我复制能力的DNA分子 理想质粒的条件 自主复制 具有一种/几种酶的单一位点，且插入外源基因后不影响复制 有筛选标记 质量小、拷贝多、易操作 重组基因的转移和表达 转移-导入受体细胞 转化-细菌 转导-动植物细胞 显微注射 电穿孔 表达-目的基因编码的蛋白质合成 转录- 启动子 翻译 PCR 法, 多聚酶链式反应Polymerase chain reaction, PCR PCR的条件-5要素 模板 引物 dNTP DNA聚合酶 Mg2+ 印迹法（Blotting） 印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立 凝胶电泳 印迹法的关键是“分子杂交” 利用碱基配对的原则 用一段小的已知的 DNA 片断去寻找（“钓”）大的未知的基因片断 小的已知的 DNA 片断——探针 遗传标记（Genetic Marker） 形态标记（Morphological Marker） 细胞学标记（Cytological Marker） 生化标记（Biochemical Marker） 分子标记（Molecular Marker） 分子标记 RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism ），限制性片段长度多态性分析 由Grodzicker等于1974年创立 凡是可以引起酶解位点变异的突变，如点突变（新产生和去除酶切位点）和一段DNA的重新组织（如插入和缺失造成酶切位点间的长度发生变化）等均可导致限制性等位片段的变化，从而产生RFLP RAPD（Random amplification polymorphism DNA ），随机扩增多态性DNA 分析 随机引物（一般8-10个碱基）非定点地扩增基因组DNA，然后用凝胶电泳分开扩增片段 基因组DNA如果在特定引物结合区域发生DNA片段插入、缺失或碱基突变，就有可能导致引物结合位点的分布发生相应的变化，导致PCR产物增加、缺少或发生分子量变化 分子标记技术的应用 分子遗传图谱的构建 遗传多样性与种质鉴定 性状相关基因的定位 分子标记辅助选择 基因工程的应用 基因工程药物 -大量生产过去难以得到或几乎不可能得到的蛋白质－肽类药物 胰岛素 1000 磅牛胰 10 克胰岛素 200 升发酵液 10 克胰岛素 干扰素 1200 升人血 1 升发酵液 2－3 万美元 / 病人 200－300 美元 / 病人 制备疫苗 病毒-减毒/灭活 诱发机体产生免疫相应的蛋白/多肽  转基因动物和植物转基因动物-体内带有外源DNA的动物转基因小鼠 “乳腺反应器”工程-哺乳动物的乳腺作为反应器转基因植物-改良植物性状 有你的参与生命科学可能更精彩 实际操作 哺乳小牛 凝乳酶基因 胃 转入啤酒酵母 凝乳酶 凝乳酶 制造奶酪 用于提高奶酪产量 * * 边缘科学 工程学的方法 按照人的意志 改造基因 是生物技术的核心部分 将外源基因（又称目的基因，是一段 DNA 片断）经切割和连接，组合到载体 DNA 分子中去，再把它转到受体细胞（亦称寄主细胞）中去，使外源基因在寄主细胞中增值和表达，从而得到期望的由这个外源基因所编码的蛋白质。 DNA重组技术 基因工程的操作流程 上游 下游 平末端 粘性末端 限制性内切酶II —— 回文结构 酶切位点 酶切位点 常用的有：质粒－－亚细胞有机