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玉米单倍体鉴定方法研究进展 　　摘要 玉米单倍体育种技术以遗传诱导为基础，已成为玉米育种的关键技术，快速、准确地识别单倍体对玉米单倍体育种非常重要。本文就玉米单倍体鉴定方法的研究进展做一综述性探讨。　　关键词 玉米；单倍体；鉴定；研究进展　　中图分类号 S513 文献标识码 A 文章编号 1007--0024-02　　Research Progress on Identifying Method of Maize Haploid　　ZHANG Rui-ping ZHOU Lian-dong WANG Wen-jie　　　　Abstract Basing on the genetic introduction，the technology of haploid breeding of maize has become the key way of maize breeding，′s very necessary to identify maize haploid fastly and we have had a review discussion on the ways of identification of maize haploid.　　Key words maize；haploid；identification；research progress　　单倍体技术是指通过自然发生或人工诱导获得单倍体，然后经过自然或人工染色体加倍恢复其倍性，并在此基础上进行选择从而获得所需纯系的方法。与传统育种方法相比，单倍体育种技术在自交系选育上具有快速、准确、高效的特点，因而越来越受到育种家的重视[1]。但是玉米单倍体自然产生率极低，一般不超过%[2]，人工诱导概率也仅有10%[3]。　　因此，快速准确地鉴定玉米单倍体尤为关键。目前，玉米单倍体的鉴定方法主要有形态学鉴定、解剖学鉴定、细胞学鉴定、放射性方法鉴定和遗传标记鉴定及分子标记鉴定等[4-6]。近年来，有学者研究出其他的玉米单倍体鉴定方法，比如在遗传标记基础上的可见光光谱以及近红外漫透射鉴定等方法。　　1 玉米单倍体鉴定方法　　 形态学鉴定　　利用形态学方法鉴定单倍体是一种直观、便捷的鉴定方法。玉米单倍体细胞染色体是正常二倍体细胞染色体数目的1/2，因而，相较于二倍体细胞，单倍体的细胞和细胞核都要小很多，正常生长状态下的植株也比较细弱。Chase[7-9]指出，单倍体玉米植株的株高、叶长、茎粗及各部分叶宽相当于二倍体植株的70%，而雄穗分枝数、苞叶数、节间数、穗行数和每行小穗数约为二倍体植株的90%。单倍体玉米植株在幼苗生长早期主根和芽鞘长短区别明显；在苗期第1片叶较短；在拔节期生长缓慢，叶片上冲窄小，株高、穗位高显著低于二倍体；且发育较快，开花期比二倍体早1～2 d。根据以上区别能够比较容易地区分出单倍体和二倍体。　　 解剖学鉴定　　植株转变成单倍体后会引起解剖学上的?化，比如单倍体的体细胞、细胞核变小，叶绿体数目减少等。一般通过分析气孔保卫细胞的大小和数目来鉴定单倍体。65 μm是区分小麦单倍体和二倍体气孔保卫细胞直径长度的可靠标准，鉴定准确率超过90%[10]。而玉米单倍体的鉴定标准定为气孔保卫细胞长度≤29 μm[11]。　　 细胞学鉴定　　鉴定植物体细胞或减数分裂细胞中染色体数目是确定倍性的最基本和最精确的方法。细胞学鉴定法通常是进行根尖分生组织细胞或减数分裂细胞压片，通过观察细胞中染色体数目区分单倍体和二倍体。流式细胞仪也是很好地用来判断细胞倍性的方法[12]。流式细胞仪应用于倍性判断上，通过对处于旺盛分裂期的细胞进行DNA含量检测，从而检测单个细胞的总核酸量。　　 放射性方法鉴定　　随着成长的植株、幼苗、种子倍性的增加，其对辐射的抵抗力提高，这种规律性同样表现在叶片上。研究表明，在X射线剂量为 C/kg时，单倍体玉米辐射2 d后出现坏死，而二倍体要20 d才出现坏死。放射性方法可以在很短的时间内照射成千上万张叶片，鉴定快速。　　 遗传标记法鉴定　　 人工肉眼分选。利用孤雌生殖诱导系为材料，并根据籽粒Navajo标记和ABPI紫色植株显性双标记系统对诱导产生的单倍体进行鉴定[13]。首先根据籽粒Navajo标记性状选出可能的单倍体籽粒，再经过有无苗期叶鞘色素或胚根色素确定单倍体的真伪。由此可将杂交籽粒可分为3类[14]：①胚盾状体、胚乳糊粉层均着色，为杂合二倍体；②盾状体、糊粉层均未着色，为花粉污染所致；③盾状体未着色、糊粉层着色，为拟单倍体籽粒，其具有正常3n胚乳和可能由未受精的雌配子发育成的胚。种植第③类籽粒，若幼苗叶鞘为绿色即为单倍体或双单倍体。　　 基于机器视觉玉米单倍体分选。在遗传标记的基础上，李卫军等[15]根据玉