牛病毒性腹泻病毒的检测反转录聚合酶链反应法RT.pdf

中国实验动物学会 团体标准 《实验动物 猴免疫缺陷病毒 （ ）普 SIV 通RT-PCR 和实时荧光RT-PCR 检测方 法》 编制说明 联 系 人：张钰 联系电话：020 编制单位：广东省实验动物监测所 时 间：2017年 03月 31 日 一、 任务来源 根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会的下达的2017年团体标准制 （修） 订计划安排，由广东省实验动物监测所负责团体标准 《实验动物 猴免疫缺陷病毒 （SIV） 普通RT-PCR 和实时荧光RT-PCR 检测方法》起草工作。该项目由全国实验动物标准化技术 委员会 （SAC/TC281）技术审查，由中国实验动物学会归口管理。 本标准的编制工作按照 《中华人民共和国国家标准GB/T1.12009标准化工作导则》第1 部分“标准的结构和编写规则”要求进行编写。本标准是在国家科技支撑计划“实验动物质量 检测关键技术研究” （项目编号2013BAK11B01）、广东省科技计划项目“广东省实验动物检 测技术平台”（项目编号2011B040200010）、 “非人灵长类实验动物标准化服务平台”( 穗 科信字2012224-41 号)课题基础上制定而成的，在制定过程中参考了国内外相关文献，对方 法的敏感性、特异性、重复性等进行了研究，并对所建立的标准方法进行了应用研究，建立 了可行、稳定、特异的猴免疫缺陷病毒普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法。 二、 主要工作过程 本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出，广东省实验动物监测所按 照团体标准研制要求和编写工作的程序，组成了由单位专家和专业技术人员参加的编写小 组，制定了编写方案，并就编写工作进行了任务分工。编制小组根据任务分工进行了资料收 集和调查研究工作，在国家科技支撑计划“实验动物质量检测关键技术研究” （项目编号 2013BAK11B01）、广东省科技计划项目“广东省实验动物检测技术平台” （项目编号 2011B040200010）和 “非人灵长类实验动物标准化服务平台”( 穗科信字2012224-41 号) 课题研究基础上，组织编写实验动物猴免疫缺陷病毒RT-PCR检测方法技术资料，通过起草 组成员的努力，多次修改、补充和完善形成了标准和编制说明初稿。 2017年3月，标准草案首先征求中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会的意见， 专家对标准稿提出了系列修订建议和意见。根据提出的意见编制组对《实验动物猴免疫缺陷 病毒RT-PCR 和实时荧光RT-PCR 检测方法》标准草案进行修改，形成本标准征求意见稿和 编制说明。 三、标准编制背景和意义 非人灵长类动物由于具有与人高度相似的生理生化特征，在人类重大疾病的基础研究 及新药临床评价中越来越受到人们的重视。如猴艾滋病(SAIDS)就是研究人艾滋病的主要动 物模型。近年来，全世界实验猴的使用量剧增，我国每年出口和引进实验猴的数量也增多。 为保证实验结果的科学性、准确性和可重复性，实验猴的质量标准化程度至关重要的。在实 验猴疾病控制方面，已报道的多种实验猴病原如猴免疫缺陷病毒、猴淋巴细胞白血病病毒、 猴D 型逆转录病毒、猴疱疹B病毒等，这些病原不仅影响实验猴质量对实验结果造成干扰， 而且有感染人或潜在感染人的危险。是国标中SPF 级猴需要排除的病原体，也是进出口猴 必须检测项目。 SIV是RNA病毒,属逆转录病毒科,慢病毒亚科。SIV感染宿主细胞后,首先将病毒的RNA 转录成双链DNA,后者再在整合酶的作用下,整合于宿主DNA中,形成前病毒。目前，国内SIV 感染诊断方法主要是针对抗体检测的血清学检测方法如酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫 酶试验 （IEA）和免疫荧光试验 （IFA）等。SIV感染猴通常表现为无症状状态，且在感染的 初期或终末期，动物免疫系统功能低下，常规血清学SＩV抗体检测可能出现假阴性的结果， 抗体检测方法不能真实反映动物体内的SIV病毒感染状态。对于需要进