联合单层培养和三维培养的两步法培养软骨细胞.pdfVIP

第二军医大学学报 年 月第 卷第 期 ：／／ ２０１０ ９ ３１ ９ ｈｔｔ ｗｗｗ．ａｓｍｍｕ．ｃｎ 　 ｐ ｊ ·９７０ · 　　 ， ， ， ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｓｅ ．２０１０ Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．９ ｙ ｙ ｐ ： ／ ·论 著· ＤＯＩ １０．３７２４ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１０．００９７０ 　 联合单层培养和三维培养的两步法培养软骨细胞 １ ２ ２ ２ ２ ２ ２  郭尚春 ，袁 霆 ，芮碧宇 ，陈 欣 ，孙 辉 ，张长青 ，曾炳芳 　 　 　 上海交通大学第六人民医院四肢显微外科研究所，上海 １． ２００２３３ 上海交通大学第六人民医院骨科，上海 ２． ２００２３３ ［摘要］ 目的 联合单层培养和三维培养方法，探讨软骨细胞培养的理想方法。 方法 第一步先将软骨细胞进行常规 　　 　 　 　 单层培养扩增，第二步再将单层培养第 代软骨细胞包裹于海藻酸钠水凝胶中进行三维培养。通过倒置显微镜定期观察软 ４ Ｒ 细胞的形态变化；应用锥虫蓝染色和 ／ ○ 试剂盒检测软骨细胞的活力和细胞增殖；通过组织化学甲苯胺蓝特异 ＬＩＶＥ ＤＥＡＤ Ｋｉｔ 性染色检测细胞外基质的形成变化。 结果 单层培养 代之前软骨细胞能保持正常的组织学形态，三维培养能使去分化的 ３ ４ 　 代软骨细胞逐渐恢复并持续维持正常的软骨组织表型。单层培养的软骨细胞的 代以前的细胞活力保持在 左右，第 代 ４ ９０％ ４ 以后开始下降；三维培养的软骨细胞活力都保持在 以上。在细胞增殖率方面，单层培养 代软骨细胞（ ）总的倍增率 ９０％ ６ ２８ｄ 是同期三维培养的 倍。单层培养的软骨细胞 代