生物分子分析体积排阻色谱.pdf

安捷伦使用指南 生物分子分析体积排阻色谱 SEC 成功分析指南 利用生物分子在溶液中的体积而进行色谱分离的方法即为体积排阻色谱 (SEC) 。 与其他色谱模式不同，SEC 的分离不依靠分析物和色谱柱固定相之间的任何化 学作用。这是从多种干扰物（包括聚集体、赋形剂、细胞碎片及其他降解产生 的杂质）中分离和分析完整蛋白质的最佳解决方案。因此， 广泛应用于开 SEC 发和生产过程中的生物治疗性分子表征。 在本指南中，我们将讨论 SEC 分离、溶质大小和分子量的影响、色谱柱选择、 流动相重要注意事项，以及 SEC 的使用规则等内容。 2 分离方法简单直接 利用 ，分子可按其在溶液中的尺寸从大到小依次分离。非常大的分子将被排出柱床， SEC 在死体积内最先洗脱。大小适中的分子依据其体积的不同可以不同程度地渗透进微孔 中（图 ），而最小的分子在微孔结构中扩散最深，从而最后洗脱。 1 较小分子在孔隙中保留时间更长， 较迟洗脱 较大分子在孔隙中保留时间更短， 较早洗脱 图 1. 不同体积的分子以不同程度渗入固定相孔隙内 如需了解关于安捷伦 SEC 生物色谱柱的更多信息，请访问 /chem/bioHPLC 3 体积排阻色谱法适用于分离和定量蛋白质混合物，因此是重组 集体十分必要，因为这会影响其有效性、保质期甚至会导致潜 蛋白生产过程中的一种重要质控手段。包括测定聚集体（二聚 在的严重免疫反应。ICH(Q6B) 等法规明确指出必须分离并定量 体、三聚体、四聚体等）以及从较大分子量的蛋白质中分离低 目标产品中的聚集体。 分子量的赋形剂和杂质（图 ）。了解并控制治疗性蛋白中的聚 2 mAU 3 完整 lgG 单体和二聚体的分离 80 色谱柱： Agilent AdvanceBio SEC, 300Å 70 1. 更高分子量聚集体 7.8 x 300 mm, 2.7 µm 2. 二聚体 （部件号 ） PL1180-5301 60 3. 单体