林木遗传育种学实验教学课件.pptVIP

实验一 植物细胞有丝分裂过程观察及染色体的常规压片技术 实验目的： 掌握醋酸洋红、石炭酸品红的染色压片技术 观察染色体在有丝分裂中的行为，分辨各时期特点 实验器具： 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、恒温水浴锅、温度计、酒精灯、烧杯、玻棒、培养皿、量筒、滴管、吸水纸、纱布、生锈铁钉、冰醋酸、酒精、对-二氯苯、盐酸、洋红、石炭酸、甲醛、山梨醇 实验材料： 蚕豆根尖 实验步骤 1、取材 植物的顶端分生组织—根尖和茎尖常用做染色体观察的材料。将蚕豆在清水中浸泡半天后，平铺于托盘中，保持湿润，待蚕豆发根后长度达到1cm左右，将其根尖截断进行预处理。 取材时间很重要，只有在根尖旺盛生长时取材，才能获得较多的细胞分裂相。一般来说，在一天中温度较高时取材，往往效果较好。 实验步骤 2、预处理 将蚕豆根尖在对-二氯苯饱和水溶液中常温处理8h后取出，清水漂洗2~3次。预处理的作用一方面能够破坏纺锤体形成，增加中期分裂相，使观察更容易；另一方面可以使染色体变短变粗，能够得到较分散的分裂相。常用的处理药剂还有8-羟基喹啉、秋水仙碱等。 实验步骤 3、固定 预处理后将根尖转入卡诺固定液（1冰醋酸：3纯酒精）进行固定，能够把正在分裂的细胞迅速杀死，使其保持细胞原有形态结构。固定时间根据材料大小而定，一般不超过24h，冰醋酸和酒精的比例也可根据材料软硬调节。固定后先用50%酒精浸泡，随后用清水漂洗3~4次，将固定液彻底洗净。如固定后的材料不立即观察，可放如70%酒精中，置于低温冰箱中保存。 实验步骤 4、解离 解离能够去掉细胞之间的果胶层，软化细胞壁，使细胞彼此分离，便于压片观察。将固定并漂洗后的蚕豆根尖转入1N HCl中，60℃水浴8~9min，操作中注意控制温度不能超过±1℃。随后取出用清水彻底冲洗，去掉残留HCl，否则会影响染色效果。解离是本实验中非常重要的一步，而解离的时间是其中的关键，不同材料需要提前进行摸索才能找到最适合的条件。 实验步骤 5、染色 本实验使用醋酸洋红和石炭酸品红两种染料对材料染色，这两种染料均属于核染料，在染色时只对染色体着色，而细胞质不着色，从而达到较清晰的染色效果，便于观察。醋酸洋红染色后可以立即观察，石炭酸品红需染0.5h以上方可观察。 实验步骤 6、压片 选取较粗壮的蚕豆根尖，放置于载玻片上，在顶端部位截取1~2mm左右的分生区，滴加一小滴染色液，用镊子将材料充分压碎，加盖玻片，用拇指垂直向下均匀用力压片，滤纸吸取多余染色液。还可用铅笔附带的橡皮头反复敲击玻片，使材料充分分散。 实验步骤 7、镜检 在光学显微镜下观察蚕豆根尖细胞有丝分裂过程，找出各个分裂时期的典型细胞，对染色体的数量、形态进行观察，并对中期染色体进行计数。如染色体清晰、分散中期分裂相较多，可制作成永久玻片长期保存。 作业 在有丝分裂中，哪个时期最有利于鉴别染色 体，为什么？ 在植物染色体压片技术中，对材料进行预处 理有什么作用？ 观察蚕豆根尖染色体数目2n=？并绘制一张有丝分裂中期的典型图像。 实验二 植物(林木)染色体组型分析 实验目的： 学会观察染色体，初步掌握染色体组型分析的方法 实验材料： 杉木细胞有丝分裂中期玻片 实验器具： 显微镜、接目测微尺、载台测微尺、照相机、剪刀、直尺、弹簧分规、放大机、放大纸、显影液、定影液 本实验中需要掌握的概念 核型/染色体组型：染色体组在细胞有丝分裂中期的表型，包括染色体数目大小形态 组型分析：对染色体组中每一个染色体进行测量，计算及形态特征的描述； 染色体基数（X）：二倍体生物一个性细胞里的全部染色体称为一个染色体组，一个染色体组包含的染色体数目成为染色体基数 实验步骤 1、显微摄影，照片放大 从染色体制片中选择染色体分散、无重叠、着丝点清楚的中期分裂相，进行显微摄影，用D11显影液显影，用3号或4号相纸放大。 2、测定染色体数目 在显微镜下对染色体分散的分裂相进行染色体计数，一般要求30~50个细胞。 实验步骤 3、形态特征的记录与测量 （1）编号，测量照相长度 （2）计算各染色体的绝对长度 绝对长度(μm)=某染色体（臂）长(mm) × 1000/放大倍数 放大倍数=330×照片黑框宽度(mm)/ 底片宽度(24mm) （3）计算相对长度（%） 某染色体长× 100% / 染色体组全长 （4）计算臂比 r=L（长臂）/S（短臂） 实验步骤 3