生物物理试验RamanSpectrometer.DOC

生物物理實驗技術 PHYS32100 clcheng Exp-3-Raman.doc 生物物理實驗技術 Raman Spectrometer 目的： 學習拉曼光譜原理及光譜所代表之物理意 原理： 當一束波數為的單色光入射一物體時，大部分的散射光具有和入射光相同的頻率；但有極少數的散射光並非如此，若我們進一步分析它們的頻率分布，將發現這些散射光和入射光的波數間有的關係，也就是散射光在的附近成對的出現。從量子系統的觀點來看，被發現和粒子的振動、轉動、電子能階的轉移有關。這種頻率發生轉換的散射光和入射光另一個不同的地方，是其具有極化的特性，而且它的強度、極化特性都和觀察方向有關。這種頻率發生改變的散射現象叫做Raman散射。 在散射光譜中，這種新的譜線就稱做Raman shift或Raman bands，且其整個譜線集合起來就叫做Raman光譜。在分子的轉動光譜、振動光譜和電子光譜上均可觀察到Raman散射光譜；其中轉動光譜的Raman散射光相對於入射光的頻移範圍較小；振動躍遷光譜的Raman散射光相對於入射光的頻率範圍和前者相較起來較大；而電子躍遷光譜的Raman散射光相對於入射光的頻率範圍更大。 如同前面所提及，Raman譜線均是在入射光子頻率附近成對出現，而頻率低於入射光頻率的Raman線稱之為Stokes線（）；而頻率較高的光譜線則稱為anti-Stokes線（）。 關於Raman效應的原理，在力學上、能量上、量子上……都有各自的說法，這裡我們從古典力學的觀點來考慮；當一個等方性﹝isotropic﹞﹝所有方向的性質均相同﹞的分子置於電場 時，分子被誘發一個偶極矩 ： 或 此時，電場和偶極矩之方向均指向同一方向，極化率α則為一純量。如果電場是由頻率ν0之電磁波所產生，則： 且 E0為電場之振幅，此擺動偶極矩引起放射入射光頻率之光﹝Rayleigh散射﹞。 如果分子之極化率隨時間改變﹝∵分子以頻率νk轉動或振動﹞，則： α0為平衡極化率，Δα則為其最大改變量。所以，誘發偶極矩變為：  最後一式乃是利用`積化和差`的公式而得；此方程式中的三相分別為Rayleigh散射﹝ν0﹞，anti-Stokes線﹝ν0+νk﹞及Stokes線﹝ν0-νk﹞的古典說明。 對於所有可能發生的Raman散射，都同時存在有Stokes線與anti-Stokes線， 可是anti-Stokes線的強度相對於Stokes 線卻是小的很多，這是因為anti-Stokes Raman散射牽涉到電子由高能階躍遷至低能階的能量變化，而根據波茲曼分布，各能級上的電子總數乃隨著能級的增加而成指數減少。[1] 三、樣品：奈米鑽石（直徑2００ｎｍ, １００ｎｍ及５ｎｍ） 四、儀器：RAMAN SPECTROSCOPY（RENISHOW-1000B） 實驗步驟： 1. 開啟雷射power，暖機30分鐘 2. 打開白光電源和XYZ移動平台電源，並將載玻片固定在平台上，再將 sample放在載玻片上 3. 利用粗細調節輪來調整平台高度至在白光時live vedio中可以看到 sample(順時針為升高，逆時針為降低) 4. 白光（上2下1）切換至雷射（上1下2），並調整平台高度至適當雷射 焦點 5. 開啟Experiment setup-WiRE 調整掃瞄的範圍（Range）(200～9000),掃 瞄的次數（Accum），雷射強度（Power），設定好後按下apply再按ok 6. 蓋上布幕，按下掃瞄的圖示2次（第一個圖示）開始掃瞄，至左下方完 成度到100％ 7. 若要中途停止掃瞄，按下下方End Monitor(並點選Abort now) 8. 掃瞄完後儲存檔案，並將所有程式關閉 9. 將sample收好，載玻片收拾好並清洗，關閉雷射power , XYZ平台開關， 白光電源開關 問題： 1. 找出鑽石特徵峰在哪邊? 還有G-band與D-band? Diamond G-band D-band 100nm 1332 400nm 5nm 2. (a)利用實驗出來數據，做baseline correction. (b)Fit出diamond、G-band、D-band的位置 (c)並