株海马肠道益生菌的筛选与初步鉴定.pdf

第３７卷　第２期 应 用 海 洋 学 学 报 Ｖｏｌ３７，Ｎｏ２ 　２０１８年５月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＯｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ Ｍａｙ，２０１８ ２株海马肠道益生菌的筛选与初步鉴定 １，２ １，２ １，２ １，３ １ １，３ 周治东 ，张跃平 ，骆巧琦 ，李海平 ，连张飞 ，张丽艳 ， ４ ４ ４ 郭炳坚 ，林荣光 ，李纪忠 （１．福建海洋研究所，福建 厦门３６１０１３；２．福建省海陆界面生态环境联合重点实验室，福建 厦门３６１００５； ３．福建省海岛与海岸带管理技术研究重点实验室，福建 厦门３６１０１３；４．福建港德水产有限公司，福建 福州３５００００） 从正常养殖的健康线纹海马（Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｅｒｅｃｔｕｓ）肠道中分离纯化到５２株细菌，通过溶血 摘要： 性实验对肠道菌群进行初筛，结果发现５２株肠道细菌均不产生溶血素，不具有潜在的致病性． 以纸片扩散法在胞外蛋白酶选择培养基上对菌株产蛋白酶的能力进行测试，筛选出２种能够分 泌胞外蛋白酶的菌株．动物安全性实验证实２株实验菌对海马无明显的毒害作用．海马生长参 数测定实验显示投喂菌株的实验组体长、体重的日平均增长率均高于不投喂菌株的对照组，证 明所筛选菌株具有一定的生长促进作用，有望对其进行海马养殖微生物制剂的开发．随后测定 了２株细菌的１６ＳｒＲＮＡ基因序列，分析相应细菌序列的同源性，构建系统发育树，结合菌株生 理生化特性及其表型特征，分别将 Ｈｍ７与 Ｈｍ２８鉴定为Ｂａｃｉｌｌｕｓｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ和Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｒｒａｇｅｅｎｏｖｏｒａ． 海洋生物学；海马；肠道益生菌；蛋白酶；水产养殖；菌种鉴定 关键词： ＤＯＩ：１０３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．２０９５４９７２２０１８０２０１１ 中图分类号：Ｐ７３５ 文献标识码：Ａ 文章编号：２０９５４９７２（２０１８）０２０２４１０７ 　　众所周知，中国水产养殖产业在现阶段发展势 殖技术等方面的研究成果较为丰富［１２１７］，但关于海 头迅猛．但是随着养殖规模不断扩大，为了防治养殖 马肠道内源性益生菌的筛选鉴定工作还鲜见报道． 作业中水产病害的爆发，存在着大量使用抗生素的 本研究从健康养殖海马肠道中分离纯化出５２株肠 现象．抗生素极易产生耐药性并残留在水产动物体 道菌株，从中筛选出２株具有分泌胞外蛋白酶能力 内，通过食物链影响到人类健康．因此，寻找环保无 的细菌Ｈｍ７和Ｈｍ２８．随后进行了安全性及生长参 害的新型水产养殖添加剂成为了当下的研究热 数测定实验，并完成了初步鉴定工作，以期能为开发 ［１４］ 点 ．益生菌是对宿主健康有促进作用的活性微 海马养殖微生物制剂提供基础研究材料． 生物，具有促进饵料的消化吸收，增强养殖动物免疫 力，改善养殖水体生态的作用．益生菌本身无毒无 １　材料与方法 害，不残留，不产生抗药性，是水产养殖行业的未来 １．１　材料 趋势 ［５９］． １．１１　菌株及其来源　供试菌株为笔者于健康线 海马是海马属（Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ）鱼类的通称，隶属 纹海马（Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｅｒｅｃｔｕｓ）肠道中分离纯化到的 于海龙目海龙科，具有温肾壮阳、活血化瘀等功效． ５２株细菌．溶血实验对照菌株副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ 临床上主要用于治疗阳痿早泄、肾虚作喘、疔疮肿毒 ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）为笔者所在实验室保存菌株． 等症，是我国名贵的传统中药材之一 ［１０１１］．随着海 １．１