小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆原核表达及蛋白质同-Core.PDFVIP

: 昆虫学报Acta Entomologica Sinica ，November 20 14 ，57 (11) 1272 － 1280 ISSN 0454 -6296 小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5 的克隆、 原核表达及蛋白质同源建模分析 2 2 1 1 2 ，* 1 ，* ， ， ， ， ， 许 炼 高焕娟 潘志针 朱育菁 陈清西 刘 波 (1． ， 350003 ;2 ． ， 361005) 福建省农业科学院农业生物资源研究所 福州 厦门大学生命科学学院 福建厦门 :【 】 Plutella xylostella ， 。【 】 摘要 目的 克隆和表达小菜蛾 氨肽酶基因 并进行基因序列分析和同源建模分析 方法 以 cDNA ， ， 小菜蛾中肠 为模板克隆分析氨肽酶基因序列 原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定 应用配体印迹分析 Cry2Ab ， 。【 】 cDNA 氨肽酶与 蛋白的结合 通过蛋白质建模对突变位点进行分析 结果 从小菜蛾中肠 扩增出氨肽酶 ， 2 853 bp ， 950 ， 107 ． 387 1 kDa ， 5 ． 24 ; 基因 该基因全长 编码 个氨基酸 预测蛋白分子量为 等电点为 进化树分析显 ， APN 5 ， PxAPN5 (GenBank :KM034756)。PxAPN5 示 克隆得到的氨肽酶基因属于 家族 将其命名为 登录号 蛋白具 ， N- 、O- GPI ， “HEXXH ” 有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征 即含有 糖基化位点 糖基化位点和 锚定位点 具有 锌 C 。 Escherichia coli PxAPN5 ， SDS， 蛋白酶结构域和 端跨膜区域 在大肠杆菌 中原核表达 表达产物经 电泳 在 110 kDa ;