等转化率法分析溶菌酶在变性剂影响下的变性过程-华中农业大学学报.PDFVIP

第 29 卷 第 1 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 29 　No . 1 20 10 年 　2 月 Journal of Huazhong A gricult ural U niver sit y Feb . 20 10 ,63～66 等转化率法分析溶菌酶在变性剂影响下的变性过程 1 2 2 2 1 3 曹小敏 　王志勇 　刘欲文 　汪存信 　吴同华 　田　耘 1. 长沙环境保护职业技术学院监测系 ,长沙 4 10004 ; 2 . 武汉大学化学与分子科学学院 ,武汉 430072 ; 3 . 湖南省环境监测中心站分析室 ,长沙 4 100 14 ( ) ( ) 摘要 　利用差示扫描量热法 D SC 研究了溶菌酶在变性剂 乙醇 、二甲基亚砜 影响下的变性过程 ,并用等 转化率法对该过程进行了分析 。结果表明:在有 、无变性剂存在情况下 ,随着扫描速率的增加 ,溶菌酶的变性温 度都缓慢增加 ;变性剂可加速溶菌酶的变性过程 ,降低溶菌酶的热稳定性 ;其中 , 乙醇对溶菌酶热稳定性的影响 大于 DM SO 。等转化率法分析表明:溶菌酶在有 、无变性剂的条件下 ,其表观活化能在不同的转化率下未保持不 变 ,而是随转化率增大而减小 ;溶菌酶的变性过程并不是标准两态可逆过程 ,而是一个涉及多种蛋白质状态的复 杂过程 。等转化率法为蛋白质单步或是多步变性过程的研究提供了一种新思路 。 关键词 　差示扫描量热法 ; 溶菌酶 ; 变性剂 ; 等转化率法 ( ) 中图法分类号 　O 643 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000242 1 20 10 0 1006304 　　蛋白通常可以通过 2 条途径发生变性 :通过温 用热分析动力学中的等转化率法 , 以鸡蛋清溶菌酶 ( ) ( ) 度的改变 热变性 或者通过溶剂中有机小分子浓度 为研究对象 ,采用差示扫描量热仪 D SC 监测溶菌 ( ) 酶在变性剂乙醇 、二甲基亚砜影响下的变性过程 ,分 的改变 ,如尿素和盐酸胍 化学变性 。溶菌酶结构 稳定 ,是研究蛋白质折叠和去折叠的理想工具 。变 析了变性过程的动力学机理及乙醇 、二甲基亚砜对 性剂对溶菌酶变性的影响虽然已有很多报道[ 12 ] ,但 变性过程的影响 ,为蛋白质单步或是多步变性过程 这些报道多从热力学角度来研究溶菌酶在变性剂影 研究提供一种新的思路 。 响下的变性过程 ,有关其动力学研究工作较少 ,且很 　材料与方法 [34 ] 少用等转化率法研究蛋白 。等转化率法是 目前 　仪器与试剂 热分析动力学中普遍采用的一种计算活化能的方 e D SC 822 型差示扫描量热仪 ,瑞士 Met t ler To 法 ,被广泛应用于处理各种非等温反应的数据 ,它能 ledo 公