介导神经递质释放的SNARE复合体调控神经递质γ氨基丁酸重摄取的机制研究-细胞生物学专业论文.docxVIP

中科院上海生命科学研究院 中科院上海生命科学研究院 研究生学位论文声明 本人郑重声明： 1)所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取 得的成栗。除文中已经注明引用的内容或属台作研究共同完成的工作外，本论 文不包含任何其饱个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做 出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 2)所呈交的学位论文，实验结果均由相应的实验数据分析得出，实验数 据真实可靠。 该声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：樊华萍 日期：2006年8月15日 研究生学位论文版权使用授权声明 本人完全了解并同意遵守中科院上海生命科学研究院有关保留、使用学位 论文的规定，即：生科院有权保留送交论文的复印件和电子文件，并提供论文 的嚣录检索及借阕、查阅；生科院可以公布论文的全部或部分内容，可以将本 学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或 其它复崔I手段保存和汇编本学位论文。保密的论文旌：解密后遵守此规定。 作者签名； 装垡莲 导师签名； 裴纲 日期： ；QQ§燕j要 弋r]01‘02a中文摘要 弋r]01‘02a 中文摘要 介导神经递质释放的SNARE复合体调控神经递质 丫一氨基丁酸重摄取的机制研究 樊华萍 (细胞生物学) 导师 裴钢研究员 摘要 神经递质释放到突触间隙是由SNARE(Soluble N-ethylmaleimide—sensitive factor attachmentproteinreceptorproteins)复合体的形成介导的。该复合体由两个 位于细胞质膜上的定向SNARE蛋白(target-SNARE)syntaxin IA和SNAP-25，以 及一个位于囊泡膜上的囊泡SNARE蛋白(vesicle．SNARE)VAMP一2三者组成。定 向SNARE蛋白syntaxin 1A和sNAP一25首先形成一个中间复合体，被稼为定向 SNARE复合体(target-SNARE complex)，待VAMP一2结合卜来进‘步形成 SNARE复合体(SNARE complex)。抑制性神经递质Y一氨基丁酸 (7-aminobutyric acid，GABA)也是通过以上过程被释放到突触问隙，与突触后膜 的GABA受体结合，向突触后传递信号，GABA转运蛋白(GABAtransporter)会 重摄取突触间隙中的GABA以终止突触的信号传递。已有研究表明定向SNARE 蛋白syntaxin IA可以与位于神经元上的GABA转运蛋白GAT-I(GABA transporter一1瑚j型直接结合，从而抑制它的重摄取功能，然而其它的SNARE蛋 白或者SNARE复合体能否调节GABA的重摄取还没有相关的报道。本文运用分 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 博上学位论文 1 介导}十经递质释放的SNARE夏合体调控神经递质Y一氨基]酸重摄取的机制硼究 介导}十经递质释放的SNARE夏合体调控神经递质Y一氨基]酸重摄取的机制硼究 子克隆、细胞GABA摄取检测、免疫细胞化学、免疫共沉淀和荧光共振能量转 移测定等方法，研究了SNARE复合体对GAT一1的调控机制。研究结果表明：在 syntaxin 1A存在的情况下SNAP一25能够有效抑伟IJGAT-1的重摄取功能，这种抑制 依赖于SNAP．25／syntaxin lA复合体即定向SNARE复合体的形成。Syntaxin 1A 的H3结构域被鉴定为结合SNAP．25和GAT-1的位点。SNAP一25与syntaxin IA结 合加强]syntaxin 1A与GAT-1的相互作用，从而显著增强Tsyntaxin IA介导的对 GAT-1重摄取功能的抑制。同时，我们发现囊泡SNARE蛋白VAMP．2与定向 SNARE复合体的结合不影响后者对GAT-1的调控作用。进一步的研究还发现一 氧化氮(NO)促进的syntaxin 1A与SNAP一25结合以及SNARE复合体形成能够加 强syntaxin 1A与GA丁-1的相互作用，从而抑制GA■1对GABA的重摄取。以上这 些结果为定向SNARE复合体对GABA转运蛋白的调节提供了分子机制，同时提 示GABA的释放和重摄取之间存在直接的反馈调节。 关键词：定向SNARE复合体、SNAP-25、syntaxin 1A、GABA转运蛋白、GAT-I 中国科学院}‘海生物化学与细胞生物学研究所 博十学位论文 2 英文摘要SNARE 英文摘要 SNARE complex involved in neurotransmitter release funcfionaHy modulates neurotransmit