久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠TLR4、NF-κBp65及炎性细胞因子表达的影响-中医诊断学专业论文.docxVIP

久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠 久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠 TLR4、NF-κB p65 及炎性细胞因子表达的影响 PAGE PAGE 1 摘 要 目的 阐明久泻灵颗粒对脾肾阳虚型 UC 模型大鼠结肠组织病理形态变化的影响以及对 IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ炎症因子和 TLR4、NF-κB p65 蛋白基因表达的影响，初步阐 释以温补脾肾法为指导的中药制剂久泻灵颗粒治疗 UC 的作用机理和科学内涵，为临床 治疗 UC 用药的探讨提供有效的理论依据。 方法 1 将 60 只 SPF 级 Wistar 大鼠随机分为空白组和模型组，采用灌服大黄水煎液加肌 肉注射氢化可的松的方法建立中医证型“脾肾阳虚”模型，同时结合 TNBS（2,4,6-三硝 基苯磺酸）加 50%乙醇混合灌肠法建立西医病“UC”模型。造模成功后将模型组随机 分为脾肾阳虚型 UC 模型 7 天、14 天、21 天组，取材后进行结肠组织病理切片制备， 采用 ELISA 法检测 FT3、FT4、T 的含量。 2 将 90 只 SPF 级 Wistar 大鼠随机分为空白组和模型组，造模方法和实验一相同。 造模成功后将模型组随机分为脾肾阳虚型 UC 模型组、久泻灵颗粒治疗 7 天、14 天、21 天组和阳性对照组（SASP 组）。久泻灵颗粒治疗组按各组要求分别给药 7 天、14 天、 21 天，阳性对照组给予柳氮磺胺吡啶治疗。取材后选用病理学方法（肉眼观察和 HE 染 色镜下观察）来观察各组大鼠结肠组织病理形态变化、ELISA 法检测大鼠血清及组织中 IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量、免疫组化法检测大鼠结肠组织中 TLR4、NF-κB p65 蛋白表达、RT-qPCR 法检测大鼠结肠组织中 TLR4、NF-κB p65 基因的表达。 结果 1 ELISA 法检测大鼠血清中 FT3、FT4、T 的含量：与空白组比较，模型 7 天、14 天、21 天组中 FT3、FT4、T 的含量均有所降低，其中模型 21 天组差异显著（P0.01）。 2 ELISA 法检测大鼠血清及组织中 IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量：与空白组比 较，UC 模型组中 IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量均有所升高，具有显著性差异（P0.01）； 与模型组比较，久泻灵颗粒治疗 7 天、14 天、21 天组及阳性对照组中各炎症因子的含 量均有所降低（P0.01 或 P0.05），且以中药治疗 21 天组差异最为显著（P0.01）。 3 RT-qPCR 法检测大鼠结肠组织中 TLR4、NF-κB p65 mRNA 表达：与模型组比较， 空白组结肠组织中 TLR4、NF-κB p65 mRNA 表达量明显低于模型组（P0.01），差异 有统计学意义；久泻灵颗粒治疗 7 天、14 天、21 天组结肠组织中 TLR4、NF-κB p65 mRNA 表达量均有所降低（P0.01 或 P0.05）。 4 免疫组化法检测大鼠结肠组织中 TLR4、NF-κB p65 蛋白表达： TLR4 表达：（1）镜下观察可见：模型组大鼠肠粘膜上皮和固有层单个核细胞都有 TLR4 阳性表达，表达强度高于空白组，并且越接近肠腔表达越强。其余各治疗组大鼠 TLR4 呈弱度或中等强度表达。（2）TLR4 阳性细胞灰度值结果为：与空白组比较，模 型组大鼠结肠组织中 TLR4 表达显著增强（P0.01），差异有统计学意义；与模型组比 较，治疗后其他各组 TLR4 表达均有所减弱（P0.01 或 P0.05）。 NF-κB p65 表达：（1）镜下观察可见：模型组中 NF-κB p65 阳性表达为单核-巨噬 细胞，呈现胞浆阳性，大鼠结肠粘膜上皮和固有层单个核细胞中都可以见到，表达强度 明显高于空白组。其余各治疗组大鼠 NF-κB p65 阳性细胞呈弱度或中等强度表达。（2） NF-κB p65 阳性细胞灰度值结果为：与空白组比较，模型组 NF-κB p65 表达显著增强 （P0.01），差异有统计学意义；与模型组比较，治疗后各组 NF-κB p65 表达显著减弱 （P0.01 或 P0.05）。 结论 1 脾肾阳虚是 UC 反复发病，病情迁延难愈的关键病机，以温补脾肾法为指导的久 泻灵颗粒治疗 UC 疗效显著，为临床用药提供了有效依据。 2 久泻灵颗粒可以明显降低脾肾阳虚型 UC 模型大鼠血清及结肠组织中 IL-1、IL-6、 TNF-α、IFN-γ炎症因子的含量，进而抑制炎性细胞浸润，减少炎症活性产物的释放，减 轻机体肠粘膜的炎症反应和组织损伤程度，促进肠粘膜修复。 3 久泻灵颗粒可以明显降低脾肾阳虚型 UC 模型大鼠中 TLR4、NF-κB p65 基因