代谢工程概述.pptxVIP

代谢工程( Metabolic Engineering );2;现代生物技术在化工、医药卫生、农林牧渔、轻工食品、能源和环境等领域都将发挥重要作用，可促进传统产业的改造和新型产业的形成，对人类社会产生深远影响。其中发酵工程是生物技术的重要组成部分，是生物技术转化成产品的重要环节。 20世纪90年代提出的代谢工程发展迅速，被视为继传统的蛋白质多肽单基因表达（第一代基因工程）、基因定向突变（第二代基因工程）之后的第三代基因工程。 ;代谢工程的产生;1956年，日本木下祝朗博士等从东京上野动物园鸟粪中分离筛选到谷氨酸产生菌，1957年日本协和发酵公司成功地进行谷氨酸发酵，这是整个氨基酸发酵的开始，继而迅速掀起了一股氨基酸发酵研究的热潮。随着对代谢发酵理论的深入研究，转向发酵菌株本身的研究，获得了很多的氨基酸高产菌株。 随后，核酸类物质发酵产??菌也以代谢控制发酵理论为指导进行选育，并奋起直追成为后起之秀。;;;;代谢工程的理论首先由Jay Bailey于1991年在“Science”杂志上论述了代谢工程的应用、潜力和设计。 同年，Greg Stephanopoulos和Joseph Vallino在“Science”杂志上论述了有关“过量生产代谢产物时的代谢工程”、“代谢网络的刚性、代谢流的分配、关键分叉点及速度限制步骤”等内容。 代谢工程也被称为“途径工程”，是基因工程的重要分支。;随着DNA重组技术的日趋成熟，代谢工程的理论和应用得到了发展。代谢工程定义的演变过程如下： （1）1988年MacQuitty指出，微生物途径工程(Microbial Pathway engineering)是利用DNA重组技术修饰各种代谢途径（包括生物体非固有的代谢途径），提高特定代谢物的产量。 （2）1991年Bailey将代谢工程(Metabolic engineering)定义为：利用DNA重组技术优化细胞的酶活、转运和调控功能，提高细胞活力。 ;（3）1991年Tong等将代谢途径工程(Metabolic pathway engineering)定义：生化途径的修饰、设计与构建。 （4）1993年Cameron认为，代谢工程(Metabolic Engineering)是利用DNA重组技术对代谢进行目的性修饰。 （5）1994年Pieperberg认为代谢工程/途径工程(Pathway engineering/Metabolic design)是改造细胞代谢途径，提高天然最终产物产量或合成新产物包括中间产物或修饰型最终产物。;（6）1994年Gregory将代谢工程(Metabolic Engineering)定义：代谢工程是对生化反应的代谢网络进行目的性修饰。 （7）1996年William将代谢工程(Metabolic Engineering)定义：为达到所需目的，对活细胞的代谢途径进行修饰。 （8）1999年Koffasl将代谢工程(Metabolic Engineering)定义：利用分子生物学原理系统分析代谢途径，设计合理的遗传修饰战略从而优化细胞生物学特性。;代谢工程较系统的定义 应用重组DNA技术和应用分析生物学相关的遗传学手段进行有精确目标的遗传操作，改变酶的功能或输送体系的功能，甚至产能系统的功能，以改进细胞某些方面的代谢活性的整套操作工作（包括代谢分析、代谢设计、遗传操作、目的代谢活性的实现）。 简而言之，代谢工程是生物化学反应代谢网络有目的的修饰。 代谢工程要解决的主要问题就是改变某些途径中的碳架物质流量或改变碳架物质流在不同途径中的流量分布。其目标就是修饰初级代谢，将碳架物质流导入目的产物的载流途径以获得产物的最大转化率。;;代谢工程的研究内容 ;2 、细胞对底物的吸收和产品的释放模型及分析 （1）转运过程的生物化学 A 转运蛋白机制：载体通道泵 B 转运动力学 C 载体媒介转运的能量方面：偶联的概念 D 细胞转运活性的调节 （2）研究方法方面 A 转运过程的实验分析 B 扩散和载体媒介转运间的区别 C 转运过程动力学分析 D 生物过程中的转运分析;3、研究胞内代谢物浓度的反应工程方法 （1）用于胞内核磁共振研究的反应工程 （2）胞内代谢物分析快速反应取样的反应工程 4、 用13C标记实验进行胞内稳态流分析 （1）稳态流分析 （2）测定稳态胞内数据 （3）代谢物13C标记系统的模型 （4）模拟和数据分析 （5）稳态标记系统的综合分析;代谢工程的研究手段 ;;;; 具体来讲，代谢工程的研究方法如下： 1