未折叠蛋白反应关键基因在小鼠前肢.DOC

Hsps基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达 阎政礼1/潘亚敏2/任传璐2,3/付虎1/朱江波2/朱勇飞1* （1.湖南师范大学医学院预防医学系，湖南 长沙 410013；2.第二军医大学卫生毒理学教研室，上海 200433；3.解放军第100医院检验科，江苏 苏州 215007） 【摘要】目的：研究热休克蛋白（Heat shock protein，Hsp）基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达情况。材料和方法：ICR小鼠受孕后，将其随机分为实验、对照两组，实验组和对照组各56只。于孕11d（gestational day 11，GD11），经口灌胃一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸、对照组孕鼠给予等体积的大豆油，并分别于GD12～GD18取两组胎鼠的后肢（每窝各取胎鼠一只），利用实时荧光定量PCR检测Hsps基因的表达丰度。PCR反应体系如下：SYBR buffer 6.5μl，cDNA 1.0μl，上下游引物各0.75μl，Mili Q水16.0μl。反应条件为：95℃ 10 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min（40个循环）。共检测了Hsps基因家族中36个Hsps基因在小鼠胚胎后肢正常发育和异常发生过程中的表达。结果：所有Hsps在小鼠胚胎后肢正常发生和异常表达过程中均表达。在GD12-18，Hsp25、Hspb3、Hsp20、Hspa1a、Hspa8、Hspa9、Hspa14、Hspab1、Trap、Hsp105、Grp170、Hspb5、Hspb7、Hspaa1在对照肢和实验肢中的表达模式一致；在GD12-GD18，Hsp25、Hspb3、Hsp20、Hspa1a、Hspa8、Hspa9、Hspa14、Hspab1、Trap、Hsp105、Grp170实验肢表达丰度高于对照肢（P0.05）；Hspb5、Hspb7、Hspaa1在GD12-GD17实验肢表达丰度高于对照肢（P0.05），而在GD18无差异。在GD12-GD17，Hsp27、Hsp40、Hsp65在实验肢的表达丰度高于对照肢（P0.05），而出生前低于对照肢（P0.05）；于GD12-GD15，HO-1、Hspa1b实验肢的表达高于对照肢（P0.05），而GD16-GD18则低于对照肢（P0.05）。于GD12-18，Hsp10、Hspb2、Hsp22、Hspb9、Hspb10、Hsp60、Hspa12a、Hspa1l、Grp78在对照和实验肢的表达模式不同，且在GD12-GD15（或GD16），实验肢中这些基因的表达丰度低于对照肢（P0.05），而在以后的发育时间则高于对照肢（P0.05）。于GD12-18，Hsp47、Hspb4、Apg-1在对照肢和实验肢中的表达模式一致；在GD12-GD15，3个基因在实验肢的表达丰度均低于对照肢（P0.05）；在GD16-GD18，Hspb4、Apg-1的丰度高于对照肢（P0.05），而Hsp47无差异。于GD12-18，Hspa13、Grp94、Hsp110在对照肢和实验肢中的表达模式一致，且实验肢中这3个基因的表达丰度均低于对照肢（P0.05）。Hspa12b于GD12-GD14在两组的表达无差异，于GD15实验肢低于对照肢（P0.05），于GD16-GD18实验肢高于对照肢（P0.05）。于GD12-GD18，Hspa2在两组的表达模式一致，且表达丰度无差异。结论：全反式视黄酸所致的小鼠胚胎后肢短肢模型中，Hsp25、Hspb3、Hsp20、Hspa1a、Hspa8、Hspa9、Hspa14、Hspab1、Trap、Hsp105、Grp170、Hspb5、Hspb7、Hspaa1、Hsp27、Hsp40、Hsp65、HO-1、Hspa1b、HO-1、Hspa1b可能起应激反应作用，Hsp10、Hspb2、Hsp22、Hspb9、Hspb10、Hsp60、Hspa12a、Hspa1l、Grp78、Hsp47、Hspb4、Apg-1可能和后肢发育有关，Hspa13、Grp94、 【关键词】热休克蛋白；胚胎；后肢；发育 基金项目：湖南师范大学博士启动基金（医110649） *Correspondence to：ZHU Yong-fei, E-mail： HYPERLINK mailto:njzhu70@163.com njzhu70@163.com