角毛壳菌几丁质酶的特性及其基因的诱导和转化-遗传学专业论文.docxVIP

国内图书分类号：Q812 国际图书分类号：632.08 理学硕士学位论文 角毛壳菌几丁质酶的特性 及其基因的诱导和转化 硕 士 研 究 生： 张欣 导 师： 杨谦教授 申 请 学 位： 理学硕士 学 科 、 专 业： 遗传学 所 在 单 位： 生命科学与工程系 答 辩 日 期： 2007年 7月 授予学位单位： 哈尔滨工业大学 Classified Index: Q812 U.D.C.: 632.08 Dissertation for the Master Degree in Science THE CHARATERISTIC OF CHITINASE FROM CHAETOMIUM CUPREUM AND THE INDUCEMENT AND TRANSFORMATION OF ITS GENE Candidate: Zhang Xin Supervisor: Prof. Yang Qian Academic Degree Applied for: Master of Science Speciailty: Genetics Affiliation: Life Science and Engineering Date of Defence: July, 2007 Degree-Conferring-Institution: Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 - - I - 摘要 植物病害一直严重威胁着农业生产，生防微生物的应用是植物病虫害综 合治理的重要手段，是保护生态环境，实现农业可持续发展的有力保证。角 毛壳菌（Chaetomium cupreum）作为一种重要的生物防治真菌，多年来倍受 研究者们的关注。 分别由六种不同植物病原真菌细胞壁、胶体几丁质、粉末几丁质和羧甲 基壳聚糖为诱导物，模拟角毛壳菌（C. cupreum）自然的重寄生过程，研究 了不同时间和不同诱导物诱导角毛壳菌产几丁质酶的影响。结果表明，上述 九种诱导物均可诱导角毛壳菌（C. cupreum）产生几丁质酶；由植物病原菌 细胞壁诱导产生的酶活性总体比由几丁质及壳聚糖诱导产生的酶活性高，由 立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）诱导产生的酶活性较高，最高可达 25.44 U/mL，而由大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）诱导产生的酶活性较低，最 高酶活性不超过 1 U/mL；同时，不同诱导物诱导角毛壳菌（C. cupreum） 产生几丁质酶的活性及酶活最高时期有所不同。 由杨树叶枯病菌（ Alternaria alternata ）细胞壁、尖孢镰刀菌 （Fusarium oxysparium）细胞壁、胶体几丁质和粉末几丁质诱导角毛壳菌 （C. cupreum）产生的几丁质酶粗酶液的最适作用温度均为 40 ℃；在 50 ℃ 以下均具有较好的热稳定性；酶促反应的最适 pH 值均为 5.0；在 pH 值 4.0- 7.0 的范围内均能保持良好的 pH 稳定性。变性剂和蛋白酶抑制剂对几丁质 酶活性也都有一定的抑制作用，其中 EDTA 的抑制作用最为明显，在 10 mmol/L 的浓度下，几丁质酶几乎丧其活性，EDTA 对金属离子有鳌合作 用，这也间接说明几丁质酶酶活性依赖于金属离子。 将角毛壳菌（C. cupreum）chi58 基因成功地连接到表达载体 pYES2 中，构建的酿酒酵母（S. scerevisiae）重组表达载体 pYES2-chi58 能够在胞 外表达蛋白，在诱导培养 60 h 时几丁质酶的活性达到最高值 0.11 U/mL。将 角毛壳菌几丁质酶活性与酿酒酵母中 chi58 基因的表达活性进行对比，结果 表明几丁质酶基因在角毛壳菌中的表达活性比在酿酒酵母中的表达活性高。 几丁质酶在生物防治和处理几丁质废物方面具有巨大的应用潜力，已成 为当前研究热点。充分研究和利用几丁质酶将会给生产生活带来巨大帮助。 关键词 角毛壳菌；生物防治；几丁质酶基因；酵母表达 - - II - Abstract The application of biological control is an important method of the synthesis control to plant diseases and insect pests and environment protection. It is also the the advantageous guarantee to the sustainable agriculture development. Through imitation th