酵母对纤维素乙醇生产中的抑制剂响应的系统生物学研究-化学工程与技术;生物化工专业论文.docx

独创性声明 willjyj山 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发 表成撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位成 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论 文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名 : f 1ft!句夺  签字日期 : ).-0 10 年 6 月 /J 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津大学 有关保留、使用学位论文的规定。 特授权天津大学可以将学位论文的全部成部分内容编入有关数据库进行检 索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供资阅和借阅。问意学 校向回家有关部门成机构送交论文的复印件和磁盘。 (保密的学位论文在解密后适用本授权说明) 学位论文作者签名:丢失内 ι 签字日期: ).01 (1 年 j 月 15 日 j 月归 1幽7 吨 1幽 7 吨 啕r z吨 -电.. ， -. 、-一 纱，咱，t 、hr 纱 ，咱 摘要 纤维素预处理产生的抑制剂和发酵终产物乙醇对酿酒酵母的抑制是纤维素 乙醉生产中的重要限制因素。增强酵母对这些抑制性物质耐受性是突破限制因素 的有效淦径，可以增强酵母在这些抑制剂存在下的乙醉生产能力。本研究利用系 统生物技术，针对代表性的抑制剂(糠醒和醋酸)和乙醇的耐受问题，研究了酿 酒酵母在不同系统水平上的响应和不同耐受商株的建异。 利用酵母全基因组表达谱芯片，研究了酿酒酵母在转录组水平上对糠醒和醋 酸的响应。糠陋的加入导致酵母参与日，.酸代谢、精股和亚精服合成等囊耍的相关 传 基因的表达下调，氧化胁迫相关基囚的转录上调。醋酸的加入使酵母特异性下调 t噜 了 21 个与线粒体核糖体蛋白相关基囚的表达，表达显著上调的主在因中要涉及多 也 种氨基酸的合成。 利用表达谱芯片研究了驯化得到的糠醒耐受商株和酣酸耐受商株与其原始 出发菌株的转录组差异。糠眠耐受菌株巾，包括细胞壁合成和细胞壁相关倍号转 导相关基圆的表达显著下调，可能导致细胞壁变搏;另外，导致的细胞膜层叠的 增强 HMGl 基网;在糠醒耐受菌株中是商表达的，这些因素可能导致糠醒转化增 强从而增强菌株的耐受能力。在醋酸耐受菌株中，参与醋酸诱导的细胞凋亡过程 的与线粒体有关的基因和细胞自我吞嗷功能相关的基因明显低表达。另外， a 型 单倍体特异性信息素响应通路相关的基因在醋酸耐受菌株中明显商表达。 运用表达谱芯片、 GC.TOF/MS 和工维蹦胶电泳技术研究具有不同乙醉耐受 性的同源单双倍体商株在不同乙醉浓度下的转录组、代谢物组和蛋白组的差异。 在转录水平七发现，乙醉诱导脂类合成调控相关基囚的表达，涉及脂肪酸链快变 化、固酵的摄取、肌醉的合成等，说明脂类在乙醇对细胞的作用中有重要作用: 乙醉还抑制多种氨基酸合成相关基因，嘿岭合成和一些辅因子代谢相关基因，这 可能是乙醉抑制细胞生长和活力的原因:两个单倍体低表达的基因主要涉放电子 转远、转运小泡形成、重金属离子的转运和代谢以及细胞壁，这可能是单双倍体 偏 商株乙醉耐受差异形成原因。代谢物图 i著进行聚类分析发现:二倍体菌株和 alpha 型单倍体的代谢相似，而且乙醉的胁迫会减小不同商株间代谢物图谱的差异:二 倍体和单倍体酵母在乙醇存在下的碳和氮代谢相关的代谢物和细胞膜细分产生 了跟著差异。利用二维凝胶电泳搞合 MALDI.TOF爪的技术研究发现:在无乙醇 存在下，单倍体商株中大多数与糖酵解相关的蛋白含量低于二倍体菌株，表明单 倍体菌株的糖酵解活性低于二倍体菌株:在乙醉胁迫下，胁迫响应相关蛋白的表 达在单倍体中上调，而在二倍体中下调，表明单双倍体对乙醉胁迫的响应机制可 能有差异。 关键词: 纤维素乙醉抑制剂糠略醋酸乙醇酿酒酵母系统生物技术 a鸟 飞 护 ABSTRACT 向 、!回E 、 ‘ 丁he end product ethanol and inhibitors produced during lignocellulose pretreatment exhibit severe toxcities to Saccharomyces cerevisiαe，which limits the production of ethanol during fermentation. In order ωbreak through it，it is the e仔icient approach to increase yeast tolerance to these inhibitory substances. In this study，the responses of yeast to