胶质瘤中着丝粒蛋白W的表达及其意义-外科学(神经外科)专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 脑胶质瘤是最为常见恶性脑肿瘤，它是一组能向胶质细胞分化特征功能的 神经上皮细胞肿瘤总称，发病率占颅内肿瘤全部的 50%-60%。近年来，尽管各 种不同治疗方法综合应用，临床疗效有一定提高，但生存时间仍较短及生活质 量不高，绝大多数患者最终都会出现肿瘤复发及转移。现有研究表明，基因中 致癌过表达与抑癌失活紧密相关，而现如今对如何致癌的分子机制不明。 CENP-W 于 2007 年首次被报道，其属于 CCAN（ constitutive centromere associated network）家族，起初因发现在多种癌性组织及小鼠成纤维细胞具有高 致瘤性故以一个假定的致癌基因并命名为 CUG2（Cancer-upregulated gene 2）； 同时 CENP-W 在中枢神经系统发育中扮演重要角色并参与神经元的功能维持， 敲除 CENP-W 可导致斑马鱼胚胎神经退行性变。国内外尚未深入探讨 CENP-W 在脑胶质瘤表达及与其生存预后之间的关系。 本研究拟初步探讨 CENP-W 在胶质瘤组织及细胞株中的表达与否、以及表 达程度与病理级别（WHO 分级）的关系，同时分析 CENP-W 的表达与胶质瘤患 者生存时间预后关系，为下一步研究 CENP-W 在脑胶质瘤发生、发展过程可能 所参与调节过程，为进一步在治疗脑胶质瘤方面提供一个新的方向。 方法：本实验设计分为三步 1. 第一步通过 Real-Time PCR、Western blotting、免疫组化检测对照组中正 常脑组织（非瘤性脑组织）、实验组中 4 个不同病理级别脑胶质瘤的 CENP-W mRNA 与蛋白表达差异，收集数据并应用统计学方法进行分析。 2. 第二步应用 Western blotting 检测方法检测 A172、LN308、U118、U87、 U251、LN229、SNB19、TJ899、TJ905 九类胶质瘤细胞株中 CENP-W 与 GAPDH 蛋白表达对比情况，收集数据并应用统计学方法进行分析。 3. 第三步所收集肿瘤标本的患者均行术后随访资料，将肿瘤患者各项相关 因素收集后进行相关统计学分析，并分析脑胶质瘤组织中 CENP-W 的表达与患 者的预后生存之间的关系。 结果： 1、RT-PCR 熔解曲线能分析到 CENP-W 和 β-actin 分别只有一个单峰，结果 II 较好。mRNA 表达水平：正常组织（1.0±0.19），I 级（3.3±0.31），II 级（5.4 ±0.43），III 级（3.5±0.42），IV 级（8.2±0.49）。CENP-W 在不同病理级别的脑 胶质瘤组织中与正常脑组织组对比，差异具有统计学意义。同时高级别的胶质 瘤中 CENP-W mRNA 的表达水平明显高于 I、II、III 级胶质瘤。 2、CENP-W 在脑胶质瘤组织中蛋白相对表达量结果：正常（0.46±0.062）， I 型（0.66±0.099），II 型（0.85±0.069），III 型（0.70±0.05），IV 型（1.02± ），人脑胶质瘤组织中 CENP-W 蛋白相对表达量高，病理 IV 级的蛋白相对 表达量是正常对照组 2 倍左右。 3、总蛋白主要从上述细胞株中提取，并与内参 GAPDH 对比，其中 A172 （0.89±0.11）、U87（0.71±0.08）、U251（0.71±0.07）、TJ899（0.83±0.09）、 TJ905（1.08±0.11）5 种胶质瘤细胞株较 HEK293 组（0.24±0.08）相对蛋白表 达量明显增高，LN308（0.46±0.07）、LN229（0.39±0.09）则差异性较柔和， 而 U118（0.21±0.07）、SNB19（0.22±0.12）较 HEK293 相对表达量小；由上 结果在大部分胶质瘤细胞株内 CENP-W 呈中-高表达。利用灰度软件进行扫描对 比，P0.05 差异具有统计学意义。 4、在人脑胶质瘤中 CENP-W 进一步用免疫组化方法进行验证。结果显示 CENP-W 在胶质瘤中表达阳性，细胞核呈阳性。而正常脑组织中表达阴性。利 用卡方检验分析 CENP-W 与两组胶质瘤关系，P=0.0140.05，差异具有统计学 意义。统计结果示在脑胶质瘤中 CENP-W 阳性率 74.0%，其中阳性表达中高恶 性组占 81.4%，低恶性组占 18.6%。 5、统计分析胶质瘤患者预后各项因素，从多因素分析上看，其中 Grade、 CENP-W 的 P 值分别为 0.00 和 0.005，故 Grade、CENP-W 对胶质瘤患者的生存 时间存在相关性显著，余因素对生存预后影响不大。高恶性组较低恶性组的预 后明显差。CENP-W 表达是阴性的胶质瘤