降低脑内NO含量对癫痫大鼠海马神经元凋亡相关因子的影响-人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：徐院花 日期：2011 年 12 月 20 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□ （请在以上方框内打―√‖ ） 学位论文作者签名：徐院花 指导教师签名：李正莉 日期：2011 年 12 月 20 日 日期：2011 年 12 月 20 日 目 录 中文摘要?????????????????????????1 英文摘要???????????????????????? 3 正 文 ???????????????????????6 前 言????????????????????????6 材料和方法???????????????????????7 结 果????????????????????????11 讨 论 ????????????????????????17 正文参考文献??????????????????????20 综 述……………………………………………………………… 24 综述参考文献??????????????????????33 附 录………………………………………………………………. 40 致 谢………………………………………………………………. 41 华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 降低脑内 NO 含量对癫痫大鼠海马神经元 凋亡相关因子的影响 硕士研究生 徐院花 导师 李正莉 教授 华中科技大学同济医学院人体解剖与组织胚胎学系 武汉 430030 中文摘要 癫痫发作是由于脑神经元过度同步放电导致突发性、短暂性脑功能异常而 引起的一种临床综合征，其病理机制十分复杂。癫痫发作可以导致脑内多种凋 亡相关基因的表达和神经元的凋亡，其中以海马神经元凋亡最显著，这可能是 导致癫痫患者后期认知功能障碍和情感障碍的原因之一。 本实验室前期研究发现，癫痫发作可导致海马产生过量 NO，后者对海马神 经元具有兴奋毒性作用。那么，癫痫发作后的细胞凋亡是不是与过量产生的 NO 有关呢？这一推测还没有得到直接证实。因此，本实验拟以 iNOS 的特异性抑 制剂 AG 预处理海人酸致痫大鼠，降低癫痫大鼠脑内 NO 含量，以凋亡相关因子 bcl-2、bax 和 Apaf-1 为检测指标，探讨降低脑内 NO 含量对癫痫模型大鼠海马 神经元相关凋亡因子的影响，为癫痫的临床治疗提供实验依据。 离体和在体实验均分为 4 组:生理盐水对照组(NS 组),海人酸致痫组(KA 组)，氨基胍预处理+海人酸组(AG+KA 组)和氨基胍组（AG 组）。离体实验中，本 课题采用新生 SD 大鼠，取海马神经元培养，获取纯化的神经元，再分别以 KA （200μmol/L）、AG(NOS 抑制剂)+KA、单独 AG（200μmol/L）作用于神经元， 然后采用免疫细胞化学法显示在不同处理因素作用 24h 和 48h 后 bcl-2、bax 的 免疫反应性。在体实验中，本课题采用 SD 雄性大鼠 80 只，KA 组侧脑室注射 KA(2μg/kg)以致痫，NS 组注射等容量的生理盐水，AG+KA 组于侧脑室注射 KA 前按照 100mg/（kg.24h）的量连续腹腔注射 AG 3d 预处理，AG 组于注射 NS 前 连续腹腔注射 AG 3d。各组大鼠在造模后观察其行为学变化 2 小时左右；并于 存活 24h 和 48h 两个时间点分批处死动物，一部分灌流取脑，石蜡包埋切片， 做 bcl-2 和 bax 的免疫组织化学染色；另一部分直接取新鲜海马组织，采用 Western blot 法或半定量 RT-PCR 法检测各组大鼠 bcl-2 、bax 蛋白及 Apaf-1 mRNA 的表达情况。 结果显示，在离体实验中，在 24 和 48h 两个时间点，KA 组 bcl-2 的免疫 反应较 NS 组减弱而 bax 的免疫反应增强；AG+KA 组 bcl-2 的免疫反应较 KA 组 增强而 bax 的免疫反应减弱；AG 组与