降钙素基因相关肽在肾性高血压大鼠心房肌电重构中的作用-生理学专业论文.docxVIP

降钙素基因相关肽在肾性高血压大鼠心房肌电重构中的作用博士生姓名： 降钙素基因相关肽在肾性高血压大鼠心房肌电重构中的作用 博士生姓名： 杨东辉 指导教师： 张万琴 教授 指导小组： 杨延宗 教授 专业名称： 生理学 摘 要 背景和目的 降钙素基因相关肽(CGRP)是迄今为止发现的作用最强的内源性扩血管物质， CGRP及其受体广泛分布于神经系统和心血管系统，对心血管系统的功能有很强的 调节作用，在高血压、冠心病、心力衰竭等疾病中，CGRP的减少和代偿性升高均 参与疾病的发展。人群中高血压病病人逐年增多，高血压病人常常并发各种房性 心律失常，如心房颤动(房颤)等，而且已经证明房颤模型和病人有明显心房肌 的电重构，心律失常的发生与心房肌的电重构和L型钙通道、瞬时外向钾通道和． Na+通道的改变密切相关。因此，我们推测高血压模型心房肌的离子通道会有特定 的改变，并最终导致房性心率失常的发生，而且这种改变可能与心房肌内CGRP 水平的变化有关。临床上研究高血压病人的心房肌离子通道的改变很难实现，以 往对高血压模型心室肌电重构的研究较多，而心房肌的电重构未见报道。故本研 究应用Sprague—Dawley(SD)大鼠，采用经典“2肾l夹”型Goldblatt高血压模 型，详细观察了在肾性高血压形成过程中，大鼠血浆、脊髓、心房肌内CGRP免 疫阳性物质(iCGRP)的动态变化，心房肌内与电重构相关的部分离子通道mRNA的 变化，包括Na+通道Ⅱ亚单位(Na+．o)、L型钙通道alc亚单位(CaL-Qlc)、钠钙 交换器(NCX)、瞬时外向钾通道Q亚单位(Kv4．3)，分析其变化的意义；利用全细 胞膜片钳技术，观察CGKP对正常SD大鼠心房肌氐。、定。．L和厶电流的影响，在 细胞水平，为探讨CGRP对心房肌离子通道重构的影响提供直接证据。同时还观 察了钙拮抗剂一地尔硫卓对心房肌内iCGRP、CaL—01c和NCX mRNA的影响，以探 讨钙拮抗剂对心肌细胞钙的内稳态的保护机制。 方法 大连医科大学动物中心提供雄性SD大鼠，6～7周龄，体重150～180R，自然 昼夜，自由饮水摄食。经典“2肾1夹”肾胜高血压模型：用内径0．22romeo．25mm 的u型银夹夹住左肾动脉近心端，右肾保留；假手术组只分离左肾动脉，不夹银 夹。术后每周2次套尾法监测尾动脉血压。。肾动脉狭窄和假手术大鼠于术后第1周、2周、4周、6周，后眼眶静脉丛采 夹。术后每周2次套尾法监测尾动脉血压。 。肾动脉狭窄和假手术大鼠于术后第1周、2周、4周、6周，后眼眶静脉丛采 血lml，分离血浆，一70。C冰箱保存，放射免疫法测定各组动物血浆iCGRP含量。 肾动脉狭窄大鼠分别于手术后2周、4周、6周断头处死，假手术和正常大鼠为对 照(每组6只)，取脊髓上段、左右心耳，洗净，吸干，一70。C冰箱保存。提取组织 蛋白和总RNA后，Westemblot比较各组动物脊髓和心房肌内iCGRP含量；RT—PCR 半定量法比较各组动物脊髓和左右心耳内CGRP mRNA的含量，以及左右心耳内 Nr．Q、CaL一Ⅱb NCX、Kv4．3 mRNA的含量。利用全细胞膜片钳技术，观察比较 两种浓度CGRP(0．05 u M和o．12 u M)在体外对正常sD大鼠心房肌三种离子通道 瓜。七。．L和k电流密度的作用。 另外，将肾动脉狭窄大鼠分3组：高剂量组(HD组)、低剂量组(LD组)和 对照组(C组)，手术后1周开始灌胃治疗，2次／天，1～1．5 ml／次，HD组和LD 组分别给钙拮抗剂一地尔硫卓250 mg／kg／d和50 mg瓜∥d，对照组灌蒸馏水。治疗后 4周后与假手术组(S组，灌蒸馏水)同时断头处死(每组6只)，Westemblot法 比较各组动物脊髓和心耳内iCGRP含量的变化，RT—PCR半定量法比较心耳 CaL—ajc和NCX mRNA含量的变化。 计量资料用均数±标准差表示，方差分析进行组间均数差异性比较，P0．05 认为有显著性差异。 结果 肾动脉狭窄大鼠于术后1周，收缩压已经明显高于术前(PO．05)，5～6周 趋于稳定。随着血压的增高，大鼠出现心室体重指数增大，提示存在心室肥厚： 左肾重量降低、明显缩小，右肾重量增加，代偿性增大。90％的模型满意。 术后1周，肾动脉狭窄大鼠血浆iCGRP己明显低于术前和假手术组(PO．05)， 术后2周最低，3周和4周有所回升(PO．05 VS 2周)，但仍明显低于术前和假手 术组(PO．05)。 Westemblot法检测大鼠脊髓内iCGRP发现，随着血压的升高，肾动脉狭窄大 鼠在术后第2、4、6周，iCGRP条带密度明显高于假手术组和正常大鼠(PO．01)。 RT—PCR半定量法比较大鼠脊髓CGRP mRNA含量发现，在术后第2、4、6周肾 动脉