姜黄素对猪AMSCs成脂分化及KLF2转录因子表达模式的影响-基础兽医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送 交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 时间： 年 月 日 导 师 签 名 ： 时间： 年 月 日 青岛农业 青岛农业大学硕士学位论文 摘要 姜黄素对猪 AMSCs 成脂分化及 KLF2 转录因子表 达模式的影响 摘 要 研究脂肪细胞分化的分子机制，关系到人类肥胖的防治策略。本研究主要利用细胞 培养、诱导分化、流式细胞仪、荧光实时定量PCR等技术，分离培养了猪脂肪间充质干 细胞（AMSCs），对其进行细胞表面抗原鉴定，然后进行成脂诱导分化，并对成脂分化 过程中Krüppel样因子2（KLF2）的表达模式进行了检测，在此基础上检测分析了姜黄素 对猪AMSCs增殖、诱导分化、以及KLF2表达模式的影响，获得了如下结果： 1.猪 AMSCs 的分离培养和鉴定 采集猪颈背部脂肪组织，经 I 型胶原酶消化，再经原代和传代培养获得 AMSCs。 选择 F3 代细胞，用流式细胞仪检测细胞表面抗原。结果显示，间充质干细胞表面抗原 CD29、CD44 和 CD105 表达量分别为 91.7%、95.1%和 95.6%，而造血干细胞表面抗原 CD34 表达量仅为 3.39%。这些结果表明，本研究所获得的 AMSCs 纯度较高。AMSCs 的生长动力学检测显示，各代传代细胞都呈现出典型的―S‖型生长曲线，在增殖速度上 无显著差异。 2.猪 AMSCs 的成脂诱导分化及 KLF2 的表达模式 取 F4 代 AMSCs 在成脂诱导培养基中诱导分化，用形态学和油红 O 染色法鉴定 AMSCs 的成脂分化程度，用实时荧光定量 PCR 检测 KLF2 的表达模式，并与过氧化物 酶体增殖物激活受体 2(PPARγ2)的表达模式进行比较。在诱导分化 2 天后，个别细胞质 中出现小脂滴，且含脂滴的细胞数量和脂滴量随诱导时间的延长而增加。诱导分化第 18 天，成脂分化率达 48.2%。在诱导分化第 2、8 和 16d，KLF2 的表达量分别为 1.84±0.206、 1.07±0.072、0.83±0.095，而 PPARγ2 mRNA 的表达量分别为 3.06±0.542、13.22±0.5736、 15.11±1.073。这些结果表明，猪 AMSCs 具有良好的成脂分化潜能，KLF2 的表达量在 成脂分化早期的前脂肪细胞阶段增加，成脂分化开始后逐步减少，证明 KLF2 是维持前 脂肪阶段的重要转录因子。 .姜黄素对猪 AMSCs 增殖的影响 取 F5 代猪 AMSCs，用含 1、5、10、15、20 和 25 μM 的姜黄素培养液进行培养， 分别于 1、3、5、7、9 d 进行了 MTT 比色检测。结果显示，1μmol/L 浓度姜黄素在细胞 培养第 5 至 9 天，能够显著促进细胞增殖（P＜0.05），5μmol/L 浓度姜黄素在细胞培养 Ⅰ 第 3 天开始显著抑制细胞增殖（P＜0.05），而高于 10 μmol/L 浓度姜黄素则在细胞培养 第 1 天就显著抑制细胞增殖（P＜0.05）。这些结果表明，低浓度姜黄素具有促进 AMSCs 增殖作用，而高浓度姜黄素则抑制猪 AMSCs 的增殖。 .姜黄素对猪 AMSCs 成脂分化的影响 取 F5 代猪 AMSCs，当细胞汇合度达 80%时，分别用含 0、1、5、10、15、20 和 25μM 的姜黄素成脂诱导液作用 24 h，然后置换成脂诱导液诱导分化，在诱导第 10 d 用 油红 O 染色提取法检测细胞内脂肪含量。结果显示，所用 1 至 25μM 姜黄素均能显著 抑制（P＜0.05）细胞的成脂分化，用 1μmol/L 获得 5.36%的抑制率，而用 25 μmol/L 获 得 68.19%的高抑制率。因此，将 25 μM 姜黄素作为抑制脂肪细胞分化的最佳浓度。 5.姜黄素对猪 AMSCs 成脂分化过程中 KLF2 和 PPARγ2 表达模式的影响 取F5代细胞，用含25μM姜黄素的成脂诱导液作用24 h，然后换成成脂诱导液，在诱 导第2、8