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学位论文作者: 日期: 年 月 日
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学位论文作者: 日期: 年 月 日
摘
摘 要
降脂益生菌对非酒精性脂肪肝大鼠胆汁酸代谢的影响及机制
研究生 白利梅
导 师 郑鹏远 教授 郑州大学第五临床学院 消化内科
河南 郑州 450014
摘 要
背景和目的:
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)包含了一 些列肝脏病理学变化,从单纯性肝细胞脂肪沉积到非酒精性脂肪性肝炎,甚至 可以发展为肝硬化或者肝细胞癌。NAFLD 特点是过多的中性脂质沉积在肝细胞 中,导致脂质利用与脂质排出失衡。目前,NAFLD 是世界上最常见的肝病,可 影响到 25%-30%人群,尤其是,在超重、肥胖及Ⅱ型糖尿病患者中,NAFLD 非 常普遍。而且,NAFLD 与代谢综合征的特征密切相关,而表现在肝脏上的这些 特征则可增加心脏代谢危险 HYPERLINK \l _bookmark8 [1-3]。
尽管 NAFLD 发病的病理生理学机制很复杂,并且尚未完全清楚 HYPERLINK \l _bookmark9 [4],目前多 数研究者认为长期高脂饮食(high fat diet, HFD)、肠道菌群紊乱紊乱参与代谢综 合征的发病。此外,一系列研究已经表明肠道菌群与肠-肝轴之间存在着双向互 动即微生物-肠-肝轴,应用益生菌干预则可以减轻肝脏脂肪浸润。然而,在非酒 精性脂肪肝中,肠道微生物如何影响肠-肝轴发挥作用目前也尚未明确。
非酒精性脂肪肝主要通过限制能量摄入、运动以及药物等方法治疗,但效 果均不理想。我们前期研究证实,给予高脂饮食大鼠降脂益生菌(DM9054+86066 菌株)干预通过调节肠道菌群,可降低大鼠血脂水平,改善肝脏脂肪变性,减 轻肝脏炎症及肝细胞损伤,并且可以上调肠道 FXR mRNA 表达水平。这表明我 们筛选的降脂益生菌可能通过调控胆汁酸代谢改善动物模型高脂血症及脂肪 肝,但其对胆汁酸代谢的具体影响及机制仍不清楚。
I
因此,本研究通过高脂饮食建立 NAFLD 大鼠模型,研究 NAFLD 大鼠胆汁
酸代谢变化,并探讨降脂益生菌如何通过调节胆汁酸代谢改善大鼠非酒精性脂 肪肝,为开拓 NAFLD 的新疗法提供理论依据。
材料和方法:
SPF 级雄性 SD 大鼠 21 只(体重 180g-200g),适应性喂养 7 天后,随机选 取 7 只分别分组为对照组,模型组,降脂益生菌干预组。对照组给予正常饮食, 模型组及干预组给予高脂饮食。对照组及模型组给予生理盐水灌胃,干预组给 予 2×1010cfu 益生菌(DM9054 及 86066 各 1×1010cfu)灌胃。建模及干预时间 均为 20 周,每周测体重及饮食量一次。实验结束后处死大鼠,留取各组大鼠血 清、肝脏、回肠组织及粪便。南京建成试剂盒检测大鼠血清甘油三酯及胆固醇 水平;ELISA 检测大鼠血清 CK-18 M30 水平。使用 Real Time PCR 评估了 CYP7A1、FXR mRNA 以及回肠 FXR、ASBT、FGF15 mRNA 表达水平。Western blot 检验肝脏 CYP7A1、FXR 及回肠 ASBT 蛋白表达水平。免疫组织化学法分析 肝脏 FXR 及肠道 FXR 蛋白表达水平。
结果:
1. 大鼠一般指标变化:与对照组相比,模型组体重明显增加,血甘油三酯、 胆固醇水平升高,血清 CK18 水平升高,差异均有统计学意义(P 0.05);与模型 组相比,降脂益生菌干预后可使大鼠体重减轻,血清甘油三酯、胆固醇及 CK18 水平降低,差异均有统计学意义(P 0.05)。
2. 病理变化:与对照组相比,模型组肝脏 HE 染色及苏丹染色可见明显炎 症细胞及脂肪浸润,益生菌干预后肝脏脂肪浸润减轻;回肠 HE 染色可见模型组 小肠绒毛损伤,
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