金属硫蛋白在低氧促进甲状腺乳头状癌发生侵袭转移中的作用研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 APS Ammonium persulfate 过硫酸铵 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 ddH2O Double distilled water 双蒸水 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 E-cad E-cadherin 上皮细胞钙粘蛋白 ECL Enhanced chemiluminescene 增强化学发光法 EMT Epithelial-mesenchymal-transformation 上皮间质转化 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 HIF-1α Hypoxia-inducible-1α 低氧诱导因子-1α KDa Kilodaolton 千道尔顿 M mol/L 摩尔每升 mA Milliampere 毫安 MT Metallothionein 金属硫蛋白 MMP-9 Matrix Metalloproteinase-9 基质金属蛋白酶 9 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 PBST Phosphate buffered solution tween 磷酸盐吐温缓冲液 PTC Papillary thyroid carcinoma 甲状腺乳头状癌 PVDF Polyvinylidene difluoride 聚偏二氟乙烯 rpm revolutions per minute 转/分 RT-PCR Revers transcription-polymerase chain reaction SDS Sodium dodecyl sulphate –polya cryl-amide gel electrophoresis 逆转录-聚合酶链反 应 十二烷基硫酸钠-聚 丙烯酰胺凝胶电泳 WB Western blot 蛋白免疫印迹 1 金属硫蛋白在低氧促进甲状腺乳头状癌发生侵袭转移 中的作用研究 摘 要 目的 本研究旨在探讨金属硫蛋白（metallothioneins, MTs）在低 氧诱导甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma, PTC）侵袭转移中 的作用及分子机制。 方法 使用 5%O2 的低氧培养箱孵育甲状腺乳头状癌 BCPAP 细 胞，用 Western blotting 及 RT-PCR 检测细胞中 MT、HIF-1α、SIP1、 E-cadherin 等相关蛋白和 mRNA 表达；使用 Transwell 观察细胞侵袭迁 移的情况。采用免疫组化 SP 法检测 72 例人甲状腺乳头状癌和 37 例癌 旁正常组织中 MT、HIF-1α、SIP1 和 MMP-9 的表达水平，分析其表达 与临床病理指标的关系及表达的相关性。将 BCPAP 细胞分为常氧、低 氧、低氧+Scrambled-siRNA、低氧+过表达空质粒、低氧+MT2AsiRNA 和低氧+MT2A 过表达组培养 12h 后检测 MT、HIF-1α、SIP1、E-cadherin 和 MMP-9 蛋白表达及侵袭迁移情况。 结果 与常氧组相比，低氧处理组 BCPAP 细胞 MT、HIF-1α、SIP1 蛋白质表达水平增高，E-cadherin 的蛋白质表达水平下降。 MT、SIP1 的 mRNA 表达水平增高，E-cadherin 的 mRNA 表达水平明显下降， HIF-1α 无显著性差异(P0.05)。侵袭与迁移实验中，低氧组的穿膜与 资助来源：国家自然科学基金面上项目 2 迁移细胞数均较常氧组显著的增多（P＜0.05）。在 72 例 PTC 组织中， MT、HIF-1α、SIP1 和 MMP-9 的阳性率分别为 52.78%、55.56%、51.39 %和 54.17%，均显著高于癌旁正常组织（P＜0.05）。MT、HIF-1α、 SIP1 和 MMP-9 的阳性表达与患者颈部淋巴结转移有显著相关性（P＜ 0.05），MMP-9 的阳性表达与肿瘤大小有显著相关性（P＜0.05）。MT、 HIF-1α 及 SIP1 的表达呈正相关。用 MT2A-siRNA 转染 BCPAP 细胞后， 低氧诱导的 MT、HIF-1α、SIP1 和 MMP-9 表达降低， E-cadherin 表 达升高。过表达 MT2A 后，低氧诱导的 MT、HIF-1α、SIP1 和 MMP-9 表达升高，E-cadherin 表达则降低。 结论 低氧诱导甲状腺乳头状癌细胞 MT、SIP1 表达上调， E-cadherin