金属配合物与L半胱氨酸、DNA相互作用的荧光性质研究及应用-分析化学专业论文.docxVIP

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独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文 不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研 究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识 到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即: 学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允 许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存和汇编本学位论文。 保 密□,在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□。 (请在以上方框内打―√‖) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 I I 摘要 本论文针对半胱氨酸的检测、小分子荧光探针与核酸的作用机理及核酸的快速 检测方法,开展了以下研究工作: 在 pH 7.5 的 B-R 缓冲溶液中,Cu2+可以和钙黄绿素络合形成 Cu2+-钙黄绿素配合 物,钙黄绿素荧光猝灭,加入 Zn2+后荧光强度稍有增加,但加入半胱氨酸后,由于 半胱氨酸和 Cu2+发生氧化还原反应,释放出钙黄绿素,同时形成 Zn2+-钙黄绿素配合 物,发出强荧光。据此,我们建立了半胱氨酸的荧光分析新方法。在优化条件下, 该方法的线性范围为 3.0×10-7—1.2×10-5 mol L-1,检出限为 4.0×10-8 mol L-1。此方法 用于实际血清样品中半胱氨酸的测定,加标回收率结果满意。 以 Tb3+-普卢利沙星(PUFX)为荧光探针,研究了 PUFX-Tb3+-DNA 体系的光谱 性质,发现 DNA 对 Tb3+-PUFX 的荧光有增强效应,且 DNA 浓度的增加与荧光强度 的增强成正比。基于此建立一种新型检测 DNA 的方法,同时对其荧光增强机理进行 了初步探讨。在实验优化条件下,该方法用于 hsDNA 和 ctDNA 测定的线性范围分 别为 3.0×10-9—1.0×10-6 g mL-1 和 5.0×10-9—8.0×10-7 g mL-1,检出限分别为 2.1×10-9 g mL-1 和 2.9×10-9 g mL-1。将该方法应用于合成样品中 DNA 的测定,结果满意。 以 Cu2+-PUFX 为荧光探针,探讨了其与 DNA 的作用方式。借助中性红染料通 过荧光和紫外光谱,推测出 Cu2+-PUFX 主要是以插入方式与 DNA 作用。此外进一 步通过 Stern-Volmer 图计算得出不同温度下的结合常数、结合位点数以及热力学常 数,结果表明 Cu2+-PUFX 与 DNA 作用属于静态猝灭,自由能为负,说明两者结合 属于自发方式,焓值为负,熵值为正,说明了 Cu2+-PUFX 主要是依靠疏水力与 DNA 以插入方式结合的。 关键词:Cu2+-钙黄绿素荧光探针;Tb3+-PUFX 荧光探针;Cu2+-PUFX 荧光探针; L-半胱氨酸;DNA II II Abstract For cysteine detection, the mechanism between small molecule fluorescent probe and nucleic acid, the quick method of nucleic acid detection, the papers main work is summarized as follows: In Britton-Robinson buffer solution of pH 7.5, Cu2+ could form the Cu2+-calcein complex, calcein fluorescence quenched. When Zn2+ was added, the fluorescence intensity increased a little. However, the presence of cysteine, owing to cysteine could reduce Cu2+ to Cu+. Meanwhile, the release of calcein from the complex could combine with Zn2+ and the fluorescence increased. So we established a new fluorescence method of cysteine detection.

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