过氧化氢酶的荧光法测定及其在海洋环境污染评价中的应用.PDF

第 42 卷 　第 1 期 ( ) Vol . 42 　No . 1 厦门大学学报 自然科学版 　2003 年 1 月 Journal of Xiamen University (Natural Science) J an . 2003 　 ( ) 文章编号 2003 过氧化氢酶的荧光法测定及其在 海洋环境污染评估中的应用 薛细平 ,陈　荣 ,赵一兵 ,郭祥群 (厦门大学化学系 ,现代分析科学教育部重点实验室 ,福建 厦门 361005) ( ) 摘要 : 建立了一种新的测定过氧化氢酶的方法. 在酸性介质中 ,Fenton 反应产生的羟基 自由基 ·OH 能将几乎无荧 ( ) 光的2 ,2′联吡啶氧化成强荧光物质 ,羟基化产物的最大激发和发射波长分别是 340 nm 和 430 nm. 过氧化氢酶 CAT 催化 H O 分解为 H O 和 O ,抑制 Fenton 反应 ,导致 2 ,2′联吡啶羟基化反应产率降低 ,体系荧光强度减弱. 体系荧光 2 2 2 2 强度的减弱与过氧化氢酶的量成正比. 用此法直接分析海洋生物样品的 CAT 活力 ,结果表明 ,该方法操作简便 、测定 快速 ,可作为一种简便的过氧化氢酶的测定方法. 关键词 : 过氧化氢酶 ;2 ,2′联吡啶 ;荧光分析 ;羟基化 ;羟基自由基 中图分类号 : O 657 . 3 文献标识码 :A 　　　　　　　　　　　　　　　 　　过氧化氢酶是生物体内一种重要的保护性氧化 力 ,获得较为满意的结果. 还原酶 ,能催化 H O 分解为 H O 和 O ,在细胞中清 2 2 2 2 除 H O ,使其不再进一步产生毒性很大的羟基 自由 1 　实验部分 2 2 基 ,对生物体起保护作用. 测定过氧化氢酶活性的方 1. 1 　仪器和试剂 法主要有测压法[ 1～3 ] 、气相色谱法[4 ] 、滴定法[5～8 ] 、 Shimadzu RF5000 荧光分光光度计 ,激发波长为 化学发光法[9 ] 、分光光度法[ 10 ] . 但这些方法在实际 340 nm ,发射波长为 430 nm ,激发和发射的狭缝宽度 应用中或者