课件：KC酶研究进展.ppt

KPC酶的检测方法 采用改良的Hodge试验， PCR直接检测KPC酶的基因。 改良Hodge试验 0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌 ATCC25922涂布MH平板 中间贴亚胺培南（10μg）纸片 接种待检菌的无菌接种环自 纸片外缘向平板边缘划线 35℃过夜培养 结果判断：亚胺培南抑菌圈内出现 待检菌矢状生长者为产碳青霉烯酶 菌株 E coli ATCC25922 改良Hodge试验 改良 Hodge 试验 发现KPC的敏感性高达100% ; 其它碳氢酶烯酶存在时试验也呈阳性 特异性90% Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001. PCR扩增及测序KPC结构基因 对上述细菌PCR检测KPC基因，无丙二酸盐枸橼酸杆菌（C1）、肺炎克雷伯菌（A1500）显示948bp左右条带，阳性对照是浙江二院赠送的产KPC-2的肺炎克雷伯菌。经测序，Blasting比对证实，为KPC-2基因 KPC – 问题 如果发现菌株产KPC，是否应该将碳氢酶烯类抗生素敏感的结果改为耐药? CLSI建议：报告MIC值，但不报告“S” 或者报告“R”、“I” 任选其一 SUMMARY KPC 属于class A 类 β-内酰胺酶 对包括超广谱头孢菌素类和碳青霉烯类在内的所有β-内酰胺类抗生素耐药 KPC酶 最常见于肺炎克雷伯菌 也曾有过报道:产酸克雷伯菌, 弗劳地枸橼酸杆菌,肠杆菌属某些种, 大肠埃希菌,沙门菌属某些种,沙雷菌属, 在铜绿中也曾有过报道（哥伦比亚） SUMMARY KPC酶位于质粒上; 接合和非接合 blaKPC两侧通常携带转座子序列 报道过的质粒blaKPC 常伴有: 一般β-内酰胺酶 超广谱β-内酰胺酶 氨基葡糖苷类耐药 质粒介导的氟喹诺酮耐药 SUMMARY 如果临床菌株对第三、第四代头孢菌素“R”， 厄他培南≥2μg/ml（19-21mm) *亚胺培南、美罗培南2-4μg/ml （16-21mm) 应进行改良 Hodge 试验 对碳氢酶烯类抗生素敏感而Hodge 试验 （+）的菌株，CLSI建议：报告MIC值，但不报告“S” 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 革兰阴性菌感染约占50% 碳青霉烯类抗生素是最后一道防线 碳青霉烯类抗生素耐药现象日益严重 碳青霉烯类 耐药的机制 染色体AmpC酶 加外膜缺失或改变 产水解碳青 霉烯类酶 青霉素结合 蛋白亲和力 的降低 主动外排系统 碳青酶烯酶 碳青霉烯酶是指能够明显水解亚胺培南或美罗培南的一类β内酰胺酶,它包括Ambler分子分类为A、B、D三类酶 碳青霉烯酶 A类为丝氨酸酶 B类是金属酶 D类为丝氨酸酶 碳青霉烯酶的分类 水解底物 酶抑制物 Ambler分子分类 Bush分群 酶 青霉素 一、二代头孢 三代头孢 氨曲南a 亚胺培南a EDTAb 克拉维酸b A 2f NMC + + + + + - + IMI + + + + + - + SME + + +- + + - + KPC + + + + + - + GES + + + - +- - + B 3 IMP + + + - + + - VIM + + + - + + - GIM + + + - + + - SPM + + + - + + - D 2d OXA + + +- - +- - +- 注：a：+，强水解（kcat2s-1）；+-，弱水解（0.5 s-1kcat2s-1）；-，不水解（kcat0.5s-1） b：+，抑制；+-，不确定；-，不抑制 碳氢酶烯酶 分类 酶 最常见的细菌 Class A KPC, SME, IMI, NMC, GES 肠杆菌科 (铜绿中报道较少) Class B (金属-b-内酰胺酶) IMP, VIM, GIM, SPM 铜绿假单胞菌 肠杆菌科细菌 不动杆菌属 Class D OXA 不动杆菌属 KPC-1 1996年Yigit在美国北卡罗来纳州一株对碳青霉烯类药物耐药的肺炎克雷伯菌中发现，由质粒介导的碳青霉烯酶KPC-1(K. pneumoniae carbapenemase-1, KPC-1) KPC-1耐药表型表现出高度亚胺培南和美罗培南耐药性(MIC都为16μg/ml) 氨基酸序列分析显示, KPC-1 与SME-1、NMC-A、