猪苓Ⅱ型核糖体失活蛋白RIPA链基因的克隆以及原核表达Molecular.PDF

猪苓 型核糖体失活蛋白(RIP)A 链基因的克隆以及原核表达 1,2 1 1* 刘蒙蒙 , 邢咏梅 , 郭顺星 (1. 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193; 2. 江苏理工学院电气信息工程学院生 物信息与医药工程研究所, 江苏 常州, 213001) 要：采用 RT-PCR 技术从中国野生猪苓菌核（Polyporus umbellatus ）中克 隆得到一个Ⅱ型核糖体失活蛋白（Type ribosome inactivating protein，RIP ）A 链基因，该基因 cDNA 包含的完整开放阅读框为 873 bp ，编码的氨基酸为290 个，分子质量为32.33 kDa ，理论等电点为5.58 。氨基酸序列分析表 ，该基因 编码的蛋白具有 RICIN 超家族蛋白的保守结构域。氨基酸序列多重比对及系统 发育树结果显示，猪苓RIP 与硬柄小皮伞 （Marasmius oreades ）亲缘关系最近。 实时荧光定量 PCR 分析表 ，这个基因在不同的菌核部位都有表达，且在蜜环 菌侵染的菌核部位表达显著上调，提示该基因可能参与了猪苓响应生物胁迫过 程。此外，利用基因重组技术构建pET15b-PuRIP 原核表达载体，获得了高质量 的His-PuRIP 融合蛋白，为多克隆抗体的制备提供材料基础，为研究基因功能奠 定基础。 关键词：猪苓; Ⅱ型核糖体失活蛋白; 基因克隆; 表达分析; 蛋白表达与纯化 中图分类号：R931 文献标志码：A Molecular cloning and Prokaryotic expression of a Type Ⅱ ribosome inactivating protein from Polyporus umbellatus 1 1,2 1 LIU Meng-meng , XING Yong-mei , GUO Shun-xing * (1. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beij ing 100193, China; 2. Institute of Bioinformatics and Medical Engineering, School of Electrical and Information Engineering, Jiangsu University of Technology, Changzhou 213001, China ) Abstract: A Type ribosome inactivating protein （RIP ）gene was cloned from Polyporus umbellatus sclerotia by RT-PCR method. The full open reading frame cDNA sequence of this gene was 873 bp in length and encoded a 290-aa protein with 收稿日期：20 16-07-25 ；修回日期：20 16-10-10 基金项目：国家自然科学基金 ）；2014 年度山西省煤基重点科技攻关项目 （FT20 14-03 ）；河 北山区特色中药材种质资源评价与仿野生栽培技术研究与示范 ） * 通讯作者 Tel / Fax: 86-10 E-mail: sxguo1986@163.com a molecular weight of 32.33 kDa and an isoelectric point of 5.58. Multiple sequence alignment reveale