玉米细菌性枯萎病菌的环介导恒温扩增LAMP检测方法-植物保护学报.PDF

植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２０１５，４２（３）：３４７－３５２ ＤＯＩ：１０１３８０２／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｚｗｂｈｘｂ．２０１５０３０１０ 玉米细菌性枯萎病菌的环介导恒温 扩增（ＬＡＭＰ）检测方法 １∗ ２ １ ２ ３ １ 封立平 　 倪　 新　 吴兴海　 伦才智　 吴翠萍　 栾　 晶 （１．山东出入境检验检疫局，青岛２６６００２；２．临沂出入境检验检疫局综合技术服务中心， 山东 临沂２７６０３４；３．江苏出入境检验检疫局，南京２１０００１） 摘要：为了提高口岸和基层实验室检疫和监测玉米细菌性枯萎病菌的准确性和工作效率，利用环 介导恒温扩增技术（ＬＡＭＰ），根据内切葡聚糖酶（ＥＧａｓｅ）基因前导序列，设计２ 个内引物和２ 个外 引物，对玉米细菌性枯萎病菌进行快速检测。 结果表明，使用玉米细菌性枯萎病菌的近缘种或引致 相似症状的病原菌菊欧文氏菌玉米致病变种 Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ ｐｖ． ｚｅａｅ、玉米内州萎蔫病菌 Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｎｅｂｒａｓｋｅｎｓｉｓ、燕麦假单胞菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｖｅｎａｅ、杓兰欧文氏菌 Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｙｐｒｉｐｅｄｉｉ检测其特异性，仅玉米细菌性枯萎病菌有扩增。 ＬＡＭＰ 检测灵敏度达到２ ｐｇ ＤＮＡ，为普通ＰＣＲ的１００倍；与其它检测方法相比，ＬＡＭＰ 方法检测时间短，效率高，不仅降低了设 备投入，易于操作，而且具有较高的灵敏度和特异性，适合玉米细菌性枯萎病菌的现场检疫和大规 模检测。 关键词：玉米细菌性枯萎病菌； 内切葡聚糖酶；环介导恒温扩增；检测 Ｌｏｏｐ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ （ＬＡＭＰ）ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐａｎｔｏｅａ ｓｔｅｗａｒｔｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｓｔｅｗａｒｔｉｉ １∗ ２ １ ２ ３ １ Ｆｅｎｇ Ｌｉｐｉｎｇ 　 Ｎｉ Ｘｉｎ 　 Ｗｕ Ｘｉｎｇｈａｉ 　 Ｌｕｎ Ｃａｉｚｈｉ 　 Ｗｕ Ｃｕｉｐｉｎｇ 　 Ｌｕａｎ Ｊｉｎｇ （１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｅｎｔｒｙ⁃Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６００２，ＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；２． Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｌｉｎｙｉ Ｅｎｔｒｙ⁃Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｌｉｎｙｉ２７６０３４，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ； ３． Ｊｉａｎｇｓｕ Ｅｎｔｒｙ⁃Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００１，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ Ｐａｎｔｏｅａ ｓｔｅｗａｒｔｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｓｔｅｗａｒｔｉｉ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｏｒｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ⁃ｌｅｖｅｌ ｔｅｓｔ ｌａｂｓ， ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｌｏｏｐ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ （ＬＡＭＰ） ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ （ＥＧａｓｅ） ｇｅｎｅ ｌｅａｄｉｎｇ ｓｅ