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实验题目:
小鼠腹腔注射筒箭毒碱ED50的测定
Determination of Cl-Tubocurarine's Median Effective Dose (ED50)??
【实验目的】
了解ED50的测定方法、原理、计算过程与意义。?
【相关理论】
1.关于量反应,质反应:
量反应是指个体上反应的强度并以数量的分级来表示;例如:血压、尿量等。
质反应是指群体中所观察到的某一效应的出现;如:生死、有效或无效。以阳性反应的出现频率或百分数来表示(全或无,阳性率)。?
2.关于ED50,LD50,以及治疗指数:
能使群体中有半数个体出现某一效应的剂量,称为半数效应量,若此效应为有效,则为半数有效量ED50,ED50是质反应的参数。若此效应为死亡时,则为半数致死量LD50。
治疗指数= LD50/ ED50=TI,该值越大越好,说明药物越安全.
可用机率单位正规法或点斜法求出LD1 ,ED99 ;LD5 ,ED95。?
3.肌松药分为去极化型和非去极化型两种。
去极化型肌松药的代表为琥珀酰胆碱,其肌松作用不能被抗胆碱酯酶药新斯的明拮抗,反而会加重。
非去极化型肌松药的代表为筒箭毒碱,其肌松作用能被新斯的明解救。?
4.测定ED50,LD50的意义
可计算治疗指数TI(LD50/ ED50),为临床安全用药提供指导。?
【实验动物】
小鼠(昆明种KM),雌雄各半。?
【实验器材】?
铁丝网,铁架台,天平,注射器等。?
【实验方法】
应用点斜法测定ED50。
应用该方法测定ED50时,实验设计必须符合以下5点要求:
1)动物以5~8组为宜;
2)每组动物数须一致;
3)各组给药剂量应呈现等比数列;
4)各组给药剂量的公比r = 1.1~1.6;
5)最大剂量(Dmax)组的阳性反应率须≥80%,最小剂量(Dmin)组的阳性反应率须≤20%?
【实验方法】
1.预实验:目的是为了找出符合上述点斜法要求5)的Dmax和Dmin。阳性反应判定标准:20min内小鼠落下3次(注意排除因互相拥挤而落下所造成的假阳性)。
2.确定组数(n)后,根据Dmax和Dmin,计算各组应给予的剂量,Dmax= rn·D min。注意公比r应在上述要求的范围内,即 = 1.1 ~ 1.6。
分别计算出各组应注射的剂量,见下表:
Group No.
?1
?2
?3
?4
?5
?6 …
Dose
Dmin? ?
?r·Dmin
2·Dmin
r3·Dmin
r4·Dmin
Dmax = r5·Dmin …
Group No. 1 2 3 4 5 6...
Dose Dmin? r·Dmin? r2·Dmin? r3·Dmin? r4·Dmin? Dmax = r5·Dmin …?
3.正式实验:
a. 筛选小鼠:将小鼠放在铁丝网上,观察10分钟,不掉下来为合格,可以参与实验。此步的目的在于排除假阳性;
b. 称重、标记;
c. 给药观察:腹腔注射ip筒箭毒碱。每组分别给予相应的剂量。
d. 计算阳性率:阳性反应标准:给药后20分钟内自铁丝网上掉下来3次者为阳性。?
【计算】
小鼠ip筒箭毒碱的ED50是多少?其95%可信区间是多少?
1) lg ED50=Xm-i(∑P-0.5)? 其中,Xm = lg Dmax ,i =lg r ,∑P:阳性率之和
因此,ED50 =lg-1 [Xm-i(∑P-0.5)]?
2) ED50的95%可信区间 = lg-1 [lg ED50±1.96Sx50], 其中,Sx50为ED50的标准误:Sx50 = i (∑P - ∑P2)1/2/(n - 1),n为各组动物数。?
【作图】
对阳性率 - 对数剂量作图。?
【思考题】
质反应的量效曲线与量反应的量效曲线有何不同??
答案:如以药物的效应为纵坐标,药物的剂量或浓度为横坐标作图,则得到直方双曲线;如将药物浓度或剂量改用对数值作图,则呈典型的S形曲线,这就是通常所说的量效曲线(图-1)。定量阐明药物的剂量(浓度)与效应之间的关系,有助于了解药物作用的性质,为临床用药提供参考。药理效应是连续增减的量变,可用具体数量或最大反应的百分数表示的,称为量反应,如血压、心率、血糖浓度等,其研究对象为单一的生物单位。如果药理效应表现为反应性质的变化,而不是随着药物剂量或浓度的增减呈连续性量的变化,则称为质反应,其反应只能用全或无、阳性或阴性表示,如存活与死亡、惊厥与不惊厥等,其研究对象为一个群体。如果用累加阳性率与对数剂量(或浓度)作图,也呈典型的对称S形量效曲线 (图-2)。
附: 1、记录表格示例1(每组用)?
No.
Weight of body (g)
Volume of injection (ml)
Time: injection
Time:end of observat
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