幽门螺杆菌 γ补劝滨Ｗ肽酶基因的克隆及序列分.doc

PAGE PAGE 1 幽门螺杆菌γ补劝滨Ｗ肽酶基因的克隆及序列分 【摘要】目的：克隆不同疾病来源的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)γ补劝滨Ｗ肽酶（Gamma瞘lutamyltranspeptidase，GGT）基因，并进行序列分析。方法：从人胃黏膜组织中分离培养获得Hp，提取其基因组DNA，对GGT基因进行PCR扩增，克隆进pMD18睺载体，进行测序和生物信息学分析，并与基因库中公布的标准株26695和J99的GGT氨基酸序列进行比对分析。结果：成功克隆了分别来源于慢性胃炎，胃溃疡，十二指肠溃疡和胃癌的4种Hp菌株GGT片段，并进行了序列分析。4种病源的HpGGT序列大小均为1704bp，编码567个氨基酸，理论分子质量是61kDa，等电点是9.3，在N端具有信号肽，含有ATP蛋白激酶结合结构域和γ补劝滨Ｗ肽酶保守结构域。序列比对分析显示，不同来源的Hp菌株GGT具有很高的保守性。结论：GGT在Hp中高度保守，具有分泌作用，可能对宿主细胞产生影响。该基因的成功克隆为进一步研究其功能打下了基础。 【关键词】幽门螺杆菌；γ补劝滨Ｗ肽酶；基因克隆；序列分析；信号肽 Cloningandsequenceanalysisofγ瞘lutamyltranspeptidasegeneofHelicobacterpylori TANGWei1,ZHANGYou瞝i2,WANGWen瞓ing3,CHENHui瞛uan4 (1.SchoolofClinicalMedicine,JiangsuUniversity;2.DepartmentofGastroenterology,AffiliatedHospitalofJiangsuUniversity;3.SchoolofLifeSciences,JiangsuUniversity;4.DepartmentofNeurology,AffiliatedHospitalofJiangsuUniversity,ZhenjiangJiangsu212001,China) ［Abstract］Objective:Tocloneandanalyzetheγ瞘lutamyltranspeptidase(GGT)geneofHelicobacterpylori(H.pylori).Methods：ThestrainsofH.pyloriwereisolatedfromhumangastricmucosawiththediseasesofchronicgastritis,gastriculcer,duodenalulcerandgastriccancer;andculturedonsolidagarmedium.TheGGTamplifiedbyPCRfromH.pyloriDNAwasclonedintoTvector.Thegenewassequencedandanalyzedbythebioinformaticsmethod.ThesequenceswerecomparedwiththetypicH.pyloristrains26695andJ99.Results：TheGGTgenewassuccessfullyclonedintopMD18睺vector.TheGGTcontains1704bpandencodes567aminoacidswithapredictedof61kDa,PIwas9.3.ThegenehadasignalpeptideintheN瞭erminalandtherewerebothproteinkinasesATP瞓indingregionsignatureandtheγ瞘lutamyltranspeptidasesignature.ThesequenceanalysisshowedthattheaminoacidsequenceswerehighlyconservedindifferentH.pyloristrains.Conclusion：GGTofH.pyloriisaconservedaminoacidandhasanimportantroleinhostcells.Cloningthisgenewillbehelpfulinitsfunctionalstudy. ［Keywords］Helicobacterpylori;γ瞘lutamyltranspeptidase;genecloning；sequenceanalysis;signalpeptide 自从1983年Warren和Mashall由人胃黏膜分离出幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,Hp）后，Hp感染与慢性胃炎（chronicgastritis,CG）、胃溃疡（