脑脊液的化学检验.doc

PAGE PAGE 1 脑脊液的化学检验 一、蛋白质定性检查（潘氏球蛋白定性试验） 1、潘氏球蛋白定性试验原理脑脊液中蛋白质主要是球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色混浊或沉淀。 2、试剂 5%苯酚溶液：取纯苯酚25ml，加蒸馏水至500ml，用力振摇，放置37℃温箱内1~2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。 饱和苯溶液：取苯酚10ml，加蒸馏水至100ml，充分混匀，置入37℃温箱中数小时，见底层有酚析出，上层即为饱和酚溶液。避光保存，一般置棕色瓶内保存。 3、操作取试剂2~3ml，置于小试管中，用毛细滴管滴入脑脊液1~2滴，在黑色背景下立即观察结果。 4、结果判断 阴性（－）：无混浊，清晰透明，不显雾状。 极弱阳性（±）：微呈白雾状，对光不易看到，在黑色背景下才能看到。 弱阳性（+）：呈灰白色白雾状。 阳性（++）：呈白色薄云雾状混浊。 强阳性（+++）：呈白色絮状沉淀或白色浓云块状。 最强阳性（++++）：立即形成白色凝块。 5、方法学评价潘氏（Pandy）试验所需标本量少，操作简单，结果观察较为明确，临床试验室常用此法。但该方法过于敏感，有一部分正常人也可出现极弱阳性（±）结果。 6、注意事项 （1）红细胞过多时，须先离心使细胞沉淀，吸取上清液进行试验。 （2）试验中所用试管应十分洁净，否则易出现假阳性结果。 （3）所用试剂苯酚如不纯，亦可引起假阳性反应；室温低于10℃，酚饱和度低，亦可引起假阳性结果。 7、正常参考值正常脑脊液中蛋白质含量仅是血浆蛋白的1/200，即0.2~0.4g/L，其成分以白蛋白为主，故蛋白定性试验结果为阴性或极弱阳性（±）。 8、临床意义有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。 二、总蛋白定量测定 脑脊液蛋白定量测定可参照尿液蛋白定量，常用的方法为双缩脲法和染料结合法。临床检验多采用磺基水杨酸-硫酸钠比浊法。 1、原理磺基水杨酸为生物碱试剂，能沉淀蛋白质，但对白蛋白的沉淀能力比球蛋白强，加适量硫酸钠后，沉淀白、球蛋白的能力趋于一致，与标准蛋白浊度对比进行定量测定。 2、试剂磺基水杨酸-硫酸钠试剂（SS-S） 磺基水杨酸3.0g 无水硫酸钠7.0g 蒸馏水加至100ml 过滤后，储存于棕色瓶中，如显色或混浊则不能用。 3、方法 （1）制备标准曲线含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀释混合人血清标准系列各0.5ml，加SS-S试剂4.5ml，充分混匀，7~15分钟后，用420nm波长比浊，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。 （2）样品检测取待测脑脊液标本各0.5ml于两只试管中，其中一只试 管加SS-S试剂4.5ml，另一试管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作为标本空白管。在与标准曲线相同的条件下比浊，所得得吸光度可从标准曲线上求得蛋白质浓度。 4、注意事项 （1）脑脊液如有多量细胞或混浊，应先离心以除去。如蛋白质浓度过高，应先行用生理盐水稀释后重新测定。 （2）加入SS-S试剂的操作手法和速度、室温及比浊前的放置时间都会影响实验结果。故操作时应注意控制加入试剂的方式和比浊时间与标准管一致。应随气温改变，勤作标准曲线。 5、正常参考值 腰穿CSF蛋白含量：0.2~0.4g/L池穿CSF蛋白含量：0.1~0.25g/L 侧脑室穿刺CSF蛋白含量：0.05~0.15g/L 脑脊液蛋白质含量与年龄成正比，儿童含量较低，成人稍高，老年人又比成年人高。 6、临床意义脑脊液蛋白质含量增高，为血脑屏障被破坏的标志。颇受临床工作者的重视。 蛋白质含量增高常见于下列情况： （1）中枢神经系统炎症。脑部感染时，脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加，蛋白质分子容易透过，首先是白蛋白增高，随后是球蛋白和纤维蛋白增高。 （2）神经根病变。如急性感染性多发性神经炎（Guillain-Barre综合征），多数病例有蛋白质增高，而细胞数正常或接近正常，即蛋白-细胞分离现象。 （3）椎管内梗阻。脑与蛛网膜下腔互不相通，血浆蛋白由脊髓中的静脉渗出，CSF蛋白质含量显著增高，有时高达30~50g/L，这时CSF变黄，可自行凝固。如脊髓肿瘤、转移癌、粘连性蛛网膜炎等。此外，早产儿CSF蛋白含量可达2g/L，新生儿为0.8~1.0g/L，出生两个月后逐渐降至正常水平。 含血的CSF蛋白质含量增高。为了鉴别原来有无蛋白质增高，可用每升红细胞700×106个约相当增加蛋白质量0.01g/L来推算，用含血CSF的蛋白质含量减去含红细胞数折算成的蛋白质含量，即为原来CSF的蛋白质含量。 三、脑脊液蛋白电泳 1、原理与血清蛋白电泳相