乙型肝炎病毒核酸YMDD变异检测.doc

PAGE PAGE 1 乙型肝炎病毒核酸YMDD变异检测 拉米呋啶是常用的核苷类抗病毒药物,对病毒有明显抑制作用，但在长期用药过程中，部分病毒可出现耐药性。一般认为，此耐药性与HBV多聚酶基因YMDD氨基酸序列（酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸）中的核酸变异有关。本文对112例慢性乙肝患者血清标本进行了YMDD检测，同时监测其血清HBV-DNA和ALT水平变化以及与乙肝血清标志物的关系，旨在探讨YMDD变异对拉米呋啶治疗效果的影响。　　1材料与方法 　　1.1标本来源112例慢性乙肝患者均来自我院传染科，男67例，女45例，年龄16～55岁。服用拉米呋啶（100mg/d)治疗48周后，进行YMDD变异检测。 　　1.2方法 　　1.2.1血清标志物检测上海实业科华生物技术有限公司乙肝二对半试剂盒。 　　1.2.2HBV-DNA定量测定深圳匹基生物有限公司荧光定量PCR法试剂盒。 　　1.2.3ALT测定上海实业科华生物技术有限公司试剂盒。 　　1.2.4YMDD变异检测深圳匹基生物有限公司荧光定量PCR法试剂盒，用煮沸法处理血清标本，反应条件：37℃3min,92℃1min,再按93℃20s,72℃20s,40个循环。根据病毒株融解温度差异来判断病毒株类型，YVDD变异株融解温度峰值最高（58±1.5)℃,其次是野生株（50±1.5）℃，而YIDD变异株峰值最低（42±1.5)℃。 　　1.2.5统计学方法组间比较采用t检验，以Plt;0.01作为显著性检验标准。 　　2结果 　　2.1YMDD检测结果112例标本，低于检出线35例，占31.25%；检出YMDD变异株28例，占25.00%；野生株49例，占43.75%。28例YMDD变异株中，YVDD变异12例，YIDD变异15例，混合株（YIDD+YVDD）1例。 　　2.2YMDD变异与病毒核酸含量及ALT水平的关系见表1。 　　表1YMDD变异与病毒核酸含量及ALT水平的关系（略） 　　2.2.1YMDD变异与病毒核酸水平HBV-DNA含量用拷贝数/ml表示，YMDD野生株为105.84±1.41，YVDD变异株为107.13±1.11，YIDD变异株为107.17±0.47。经统计学分析，野生株与2个变异株HBV-DNA含量均差异有显著性（Plt;0.01），而两个变异株之间，HBV-DNA含量差异无非常显著性。变异组治疗后HBV-DNA水平低于治疗前基础水平。 　　2.2.2YMDD变异与ALT水平YMDD野生株ALT水平为（58±50.5）u/L，异常率为46.94%（23/49），YMDD变异株为（82±70.6）u/L，异常率为64.29%，两者ALT水平及异常率均差异有非常显著性（Plt;0.01）；低于检测线的病毒株35例ALT水平为（40±31.5)u/L，异常率为8.57%（3/35）。变异发生后，尽管部分患者ALT有反跳，但基本低于治疗前水平。 　　2.3YMDD变异与血清标志物关系YMDD野生株患者HBsAg、HBeAg、HbcAg阳性率为63.27%（31/49），变异株患者为46.43%（13/28），经χ2检验，两者比较差异有显著性（Plt;0.05），HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性率在变异株与野生株之间差异无显著性（Pgt;0.05）。见表2。 　　表2YMDD变异与血清标志物的关系(略) 　　3讨论 　　拉米呋啶是脱氧嘧啶核苷类药物，它与乙肝多聚酶结合后，竞争抑制多聚酶活性，使HBV-DNA的链合成终止，从而抑制病毒复制［1］，文献报道有16%～32%的病人在用拉米呋啶治疗1年后，发现YMDD区突变，并伴随HBV-DNA和ALT水平上升［2］，本次实验变异率为31.25%，与文献报道结果基本一致。有研究表明，一旦出现YMDD变异株，HBV复制的效率为原来的万分之一，导致HBV-DNA含量的反跳和ALT变化［3］。本次实验YMDD变异株患者HBV-DNA含量、ALT水平及阳性率均高于YMDD野生株患者，进一步证实了YMDD变异与HBV-DNA含量及ALT水平异常有关，是导致拉米呋啶治疗失败的主要因素。临床一般认为，用拉米呋啶治疗HBeAg阳性患者，血清HBeAg和抗-HBe的转换可以作为停药的标准［4］，本实验YMDD变异株患者治疗前后大三阳的阳性率无显著差异，说明YMDD变异株将影响HBeAg和抗-HBe的转换，导致治疗失败。提示临床，在拉米呋啶用药过程中需严密观察HBV-DNA含量和ALT水平变化，一旦出现YMDD变异株，应立即调整治疗方案。 　　【参考文献】 　　1JardiR,ButiM,RodrigueaFF,etal.Rapiddetectionoflamivudine-re-sistanthepat