荧光定量PCR检测HBV DNA与HBVm关系探讨.doc

PAGE PAGE 1 荧光定量PCR检测HBVDNA与HBVm关系探讨 　　【摘要】目的探讨荧光定量PCR检测HBVDNA与HBVm的关系。方法采用荧光定量PCR法和酶联免疫吸附试验（ELISA）对1600份HBVm6种不同阳性模式及100份HBVm全阴模式血清进行HBVDNA检测。结果不同阳性模式HBeAg（+）组HBVDNA阳性率明显高于HBeAg（-）组，有显著性差异（Plt;0.01）;HBVm全阴组，HBVDNA阳性率为2%。结论荧光定量PCR法检测HBVDNA是乙型肝炎病毒复制最直接可信的指标，可反映HBV真实感染和复制状态，特别是低复制状态，明显优于ELISA法检测HBVm，具有重要临床意义。酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测乙型肝炎病毒是目前最常用的方法之一，但该法影响因素颇多。近年发展起来的荧光定量聚合酶链反应（以下简称PCR法）。不仅可避免常规PCR扩增产物易污染而导致的假阳性、避免ELISA法灵敏度不高等弊病，同时可报告HBV-DNA体内复制的定量结果。本文用PCR法与ELISA法对1600份血清标志物（HBVm）6种不同阳性模式样本对比检测，以及100份HBVm全阴者两法结果进行对比分析。以探讨荧光定量PCR法的临床应用价值。 1材料与方法 1.1样本来源2003年10月～2004年3月，本院住院及门诊就诊患者检查HBVm及HBVDNA者1600例血清样本，100例HBVm全阴者血清样本。 1.2主要仪器LightCycler全自动荧光定量PCR诊断系统（瑞士罗氏公司生产），酶标仪（芬兰:DENCEYDRAGONWeScanMK2），洗板机（芬兰:absystemsWallWashAc）。 1.3主要试剂深圳PG公司生产的PCR定量检测试剂盒（有效期内使用），厦门新创“二对半”试剂盒（有效期内使用），质控物（ELISA法质控物含量HBs:1ng/ml，抗HBs:30MIU/ml，HBe:2NCU/ml，HBVDNA:4.0×104cps/ml）。以上质控物均由卫生部临床检验中心供给，有效期内使用。 1.4方法严格按PCR及ELISA试剂盒说明书要求操作，同时作阴阳性对照及室内质量控制。 2结果 2.1HBVm不同阳性模式与HBVDNA检测结果HBVm检测阳性结果，分为6种血清学标志模式共1600例与PCR法检测HBVDNA结果比较，结果见表1。 2.2100例HBVm全阴模式与HBVDNA关系见表2。 表1HBVm不同阳性模式与HBVDNA检测结果（略） 3讨论 乙型肝炎血清标志物HBsAg（+），HBeAg（+），抗-HBc（+）模式，提示患者体内HBVDNA呈活动性复制，传染性强。本文结果表明该类型实验组PCR法HBVDNA阳性其含量以每毫升的拷贝数定量发出报告，能直接判断体内HBVDNA的复制水平，检出率高达99.2%，高于张春兰等［1］报道的93.75%。该模式组仅有0.8%患者HBVDNA结果lt;4×103cps/ml，是否与实验误差有关。第二实验组血清标志物为HBsAg（+），抗-HBe（+），抗-HBc（+）模式HBVDNA检出阳性率为66.7%，明显低于第一组（Plt;0.01）。一般情况下，抗-HBe（+）表明复制处于较低水平，以荧光定量PCR法亦可判断体内HBVDNA复制水平。本实验证明，HBeAg（-）不能排除HBVDNA的复制。从表1可见，第一组与第二组及第四组，即HBeAg（+）与HBeAg（-）组比较，第一组HBVDNA阳性率除明显高于第二组外，同时明显高于第四组（Plt;0.01）。从HBVDNA定量水平，证实了HBeAg确实了是反映病毒复制的良好指标。HBVm全阴组测得HBVDNA阳性率为2%，表明该组患者并不能排除HBV感染，原因与ELISA对低含量者检测灵敏度不高或HBV发生基因变异有关［2］。ELISA检测肝炎病毒是目前最常用方法之一。但影响因素颇多，如加样时间，试剂平衡时间，样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果，使弱阳性样本漏检［3］。近年已有许多学者报道了HBsAg阴性与HBV感染，Pao等［］4报道以PCR法检出HBsAg（-）组HBVDNA阳性检出率为11%。其中单抗-HBs者HBVDNA检出率为11.86%。本文实验报道仅2%，可能因为例数太少及全阴者未查HBVDNA之故。关于HBsAg（+）及其它单一阳性者，另一论文总结。 综上所述，乙型肝炎患者HBV荧光定量检测是病毒复制最直接可信的指标，动态荧光定量PCR检测HBVDNA对监测乙型肝炎感染的病情发展及抗HBV复制药物的疗效具有极重要的意义。对于HBVm全阴及单一抗HBs（+）者，观察其HBVDNA含量亦具有重要意义，有待进一步研究、探讨。 参考文献 1张春兰，谢敏，蔡