课件：荧光原位杂技技术及其临床应用李宇中.ppt

FISH用于产前诊断主要探针 染色体数目异常是临床上最主要的染色体病，其中13号、18 号、21 号、X、Y 染色体数目异常最为常见， 由于13，18，21，X 和Y 这5 种染色体的非整倍体异常约占所有染色体异常的65％～80％，占染色体异常导致出生缺陷的85％～95％， 因此FISH 用于快速产前诊断主要是针对这5 种染色体设计使用荧光标记的探针。 FISH 用于产前诊断的指征 a.妊娠妇女血清学筛查 风险高危者（大于等于1/270)及临界风险者 (小于1/270至大于等于1/1000）。 b.妊娠妇女到预产期时高龄年龄≥35 岁。 c.双亲之一为易位携带者。 d.不良孕产史。 e.超声检查胎儿异常者。 FISH敏感度和特异度均较高 FISH 用于产前诊断检测的敏感度和特异度均较高。 例1. 有报道FISH 检测4 500 例未培养羊水细胞，对于常染色体的敏感度为92.6%，特异度为100％；性染色体敏感度为100％，特异度为99.9%。 例2. Tepperberg 等总结美国25 个实验室应用FISH 检测5 348 例羊水资料，结果敏感度为99.6%，特异度为99.98%，阳性预测值为99.8%，阴性预测值为99.96%。 例3. Caine 等回顾性分析24 742 例FISH检测羊水间期细胞的敏感度为99.54%，特异度为99.97%，阳性预测值为99.54%，阴性预测值为99.97%； 由此可见，FISH 用于快速产前诊断的准确性较高。 FISH产前诊断技术临床应用 染色体数目异常是引起新生儿先天性遗传病的主要因素之一。传统的羊水细胞培养、染色体核型分析是宫内产前诊断胎儿染色体疾病的主要方法, 但该方法所需时间长、技术难度大、易受培养条件的影响。对未经培养的羊水间期细胞进行荧光原位杂交检测, 快速诊断胎儿常见的三体型及性染色体数目异常, 具有快速、简便、敏感、特异性强等优点。 FISH产前诊断技术临床应用价值 正常情况下羊水失败率约为0.5%， 超过妊娠24 周后培养失败率升至10%。FISH 检测的成功率2002 年后陆续有大样本研究报道了较为一致的成功率，约为95%～98％。后随着商品化探针的上市，操作程序规范化后失败率大大降低。传统核型分析最少需要15 mL 羊水标本，而FISH 只需3～5 mL 羊水。 FISH产前诊断技术在国外应用 FISH 技术最先在美国用于产前诊断，而到2000 年鉴于FISH 技术具有高度的敏感性和特异性，美国医学遗传学会（ ACMG ）宣布FISH 技术可以用于常见染色体数目异常的确诊。此后，FISH 技术在一些发达国家被广泛用于快速产前诊断。检测结果一般可以在24～48 h 就可以获得，且检测结果与核型分析结果的一致性可以达到99.5％以上。 产前诊断技术临床应用价值 在过去30 年中视核型分析为产前诊断的“金标准”。FISH 技术与核型分析相比，可快速得到结果，该优势能弥补其在诊断准确性方面的欠缺，特别是随着FISH 探针的商品化及实验方法日臻完善，FISH 的可靠性逐步证实，间期细胞核FISH 技术可以提供可靠的产前诊断结果，结果直观且便于解释，满足了临床的需要，有利于临床决策和减轻孕妇过于焦虑的情绪。 FISH 与母源细胞污染 羊膜腔穿刺时母源细胞污染可影响标本质量，导致误诊发生。建议发生严重母血污染时不要进行FISH 检测。影响FISH 结果的母体细胞来源羊膜腔穿刺中母体的淋巴细胞， 这些细胞在体外培养时不会生长。出现母体细胞污染的原因很大程度上与临床标本采集时操作有关。因此临床羊膜腔穿过程中应尽量避开胎盘穿刺，对最初抽出的2～4 mL 羊水改行其他检测。 稽留流产与染色体异常 孕早期胚胎染色体异常是稽留流产最重 要的原因的原因之一，自然流产中胚胎染色体异 常占50%左右，而胚胎染色体数目异常，包括整 倍体和非整倍体，为其发生的重要因素。 FISH应用于流产胚胎绒毛 绒毛染色体检查是诊断胎儿染色体异常的可靠依据。由于绒毛染色体制备成功率易受其取材时间及标本质量的影响，常造成标本分裂相少或染色体形态不佳等状况，给诊断带来困难。而FISH 分析无需作细胞培养及显带分析，仅作细胞计数，其优势是不仅适用于分裂中期的染色体，也适用于间期核及细胞周期的所有阶段。 FISH应用于流产胚胎绒毛 选用13、16、18、21、22、X和Y染色体上 的探针对未培养的绒毛组织进行荧光原位杂交来