荧光定量PCR检测234例乙型肝炎病毒DNA结果分析.doc

PAGE PAGE 1 荧光定量PCR检测234例乙型肝炎病毒DNA结果分析 [摘要]目的：用FQ-PCR检测血样中乙型肝炎病毒DNA拷贝数，了解用ELISA法检测HBV-M不同的标志物组合时，其对应的HBV-DNA阴、阳性及阳性的拷贝数。方法：采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测234例血样。结果：97例HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗-HBc（+），其HBV-DNA阳性为96例，定量结果对数值的靶值为7.91；60例HBsAg（+）、抗-HBe（+）、抗-HBc（+），其HBV-DNA阳性为37例，定量结果对数值的靶值为4.73；13例抗-HBc（+），其HBV-DNA阳性为2例，定量结果对数值的靶值为3.22；而4例HBV-M全（-）的HBV-DNA也全（-）。结论：FQ-PCR能快速、特异、灵敏地定量检测血液及各种体液中病原体的DNA或RNA，对疾病的诊断，治疗过程的监测，愈后监控及药效评价等都具有很高的实用价值。 [关键词]：病毒（HBV）及其血清学标志物（HBV-M）；荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）；酶联免疫吸附试验（ELISA） 临床常用ELISA法进行HBV-M的检测和PCR法进行HBV-DNA的定性检测来判断HBV的感染或疗效。FQ-PCR是在定性PCR基础上，增加了一条荧光探针，并标记荧光报告基团（R）和荧光淬灭基团（Q）。当荧光探针保持完整时，R的荧光信号被Q所淬灭；而在PCR反应中，Taq酶将探针切断，R释放出荧光信号，检测其荧光信号强弱，可反映HBV-DNA的浓度。并且因为FQ-PCR克服了定性PCR的易污染、假阳性高、操作者要接触强致癌物等不足，整个操作过程仅需开盖一次，因而其临床应用越来越广泛。本文采用FQ-PCR法和ELISA法对照检查了234例标本，现将结果报告于下。 1材料与方法 1.1标本来源 2001年10～12月，本院门诊和住院部的234例患者，男132例，女102例，年龄7岁～71岁。清晨空腹静脉取血2ml送检。 1.2仪器、试剂与方法 酶标仪是荷兰We11scanMK3,洗板机是荷兰We11wash4，ELISA试剂是上海荣盛公司提供，并严格按照其说明书操作。基因扩增仪是日本LifeExpress品牌，微量荧光检测仪是上海棱光公司DA620型，FQ-PCR检测HBV-DNA试剂是广州中山大学达安基因公司提供，并严格按照说明书操作。 2结果 ELISA法检测HBV-M时，以HBsAg为1，抗-HBs为2，HBeAg为3，抗-HBe为4，-HBc为5。结果见表1。 表1HBV-DNA定量结果与HBV-M检测结果比较 组别例数HBV-M阳性HBV-DNA阳性（率）HBV-DNA阳性定量结果对数值（X+/-S）1971，3，596（99%）7.91+/-1.132601，4，537（61.7%）4.73+/-0.943121，54（33.3%）4.0141714（23.5%）3.615112，51（9.1%）3.16691，38（88.9%）6.94771，42（28.6%）3.8781352（15.4%）3.229720（0%）01013，51（100%）8.17合计234155（66.2%）3讨论 用ELISA法作HBV-M是临床应用最广泛的诊断HBV感染，评价HBV传染性及愈后的手段。本文中，组别1（俗称大三阳），其FQ-PCR法的HBV-DNA阳性率达99%，定量结果对数值高达7.91，表明HBV-DNA复制活跃，HBV浓度高，传染性很强。组别2（俗称小三阳），其FQ-PCR法的HBV-DNA阳性率为61.7%，定量结果对数值为4.73，相对于组别1而言，其HBV-DNA复制欠活跃，HBV浓度稍低一些，传染性也稍差一些。 FQ-PCR法检测HBV-DNA的阳性率与HBV-M的HBeAg的阳性有很好的伴随关系。从组别1和组别6可以看出：当HBeAg（+）时，HBV-DNA的阳性率分别为99%和88.9%，且定量结果对数值为7.91和6.94。组别10的定量结果对数值更高达8.17。这3组的定量结果对数值与其余各组的值，分别作采用成组设计的两样本均数比较的t检验统计学处理，发现有显著性差异。当HBeAg（+）时，HBV-DNA却为（-），可能的原因是：药物使HBV-DNA复制受抑制或试验中样本HBV-DNA丢失或与引物对应的DNA序列变异。 在所有HBsAg（+）202例中，FQ-PCR法HBV-DNA阳性151例，阳性率74.8%。阴性的51例中有7例是在半年到2年前大三阳（当时未作HBV-DNA定量），接受贺普丁或干扰素治疗后再测HBV-DNA定量的。51例阴性的可能原因是HBV-DNA整合到宿主细胞内或PCR引