重组抗原检测抗干燥综合征A抗原的自身抗体.doc

PAGE PAGE 1 重组抗原检测抗干燥综合征A抗原的自身抗体 【摘要】目的　建立便捷的检测抗干燥综合征(SS)A抗原(分子量为60000的多肽成分)的自身抗体(抗SSA)的方法，以利于疾病的早期诊断和病程监控。方法　构建基因工程菌，表达SSA-60000融合蛋白。经GST柱层析法纯化后，分别经免疫印迹(IBT)法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测20份SS患者血清、60份系统性红斑狼疮(SLE)患者血清和30份正常人血清。结果　利用重组抗原检测抗SSA自身抗体敏感性较高，而且抗体滴度与SLE病程相关。用IBT法，SLE和SS患者的阳性率分别为43.3%和10%；用ELISA法，SLE和SS患者的阳性率分别为50%和25%。结论　利用重组抗原对自身抗体进行定性、定量分析有助于对自身免疫病的诊断和监控。Recombinantantigenfordetectinganti-SSAautoantibody DENGAnmei,ZHONGRenqian,CHENSunxiao,etal. 　　ClinicalImmunologyCenter,ChangzhengHospital,Shanghai200003,China 　　【Abstract】Objective　Todetectthelevelofanti-SSA-60000autoantibodyinpatientswithautoimmunediseasesaswellasitsassaymethods.Methods　WeclonedRo-60000/SSAcDNAandexpressedtheSSA-60000-GSTfusionproteinsinE.coliJM109.Purifiedrecombinantantigenswereusedinimmunoblottingtest(IBT)andenzyme-linkedimmunosorbentassays(ELISA)weredeveloped.20SSsera,60SLEsera,30normalcontrolseraweretested.Results　Therecombinantantigenimprovedthesensitivityfordetectinganti-SSA-60000autoantibody.LongitudinalstudiesofseveralpatientswithSLEshowedthatthetitresofanti-SSA-60000autoantibodywererelatedtothecourseofdisease.Conclusion　Recombinantautoantigenisusefulforanalysisofauotantibodytodiagnoseandcontroldiseases. 　　【Keywords】Autoimmunediseases;Autoantibodies;Recombinantproteins;　Enzyme-linkedimmunosorbentassay 　　在系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)等自身免疫性疾病中，干燥综合征A抗原(SSA)是重要的自身抗原［1］。在约70％～80％的SS患者和30%～40％的SLE患者存在抗SSA抗体。SSA抗原多肽包括60000和52000两种分子量不同的成分。传统上用于检测抗体的SSA抗原从动物组织中提取，制备较复杂，且来源不同，成分有所差异。因此，我们尝试用重组抗原检测抗SSA-60000自身抗体(抗SSA-60000)，建立敏感性和特异性良好的检测方法，以利于疾病的早期诊断和病程监控。 　　材料和方法 　　一、材料 　　1.人肝λgt11cDNA文库（R.W.Davis博士赠送）；PGEX-2T质粒，JM109菌株(ZRLian博士赠送) 　　2.标准抗SSA-60000阳性血清由美国疾病控制中心提供。患者血清来自本院1994年8月至1997年8月收治的住院患者，其中SLE60例、SS20例。所有患者均符合美国风湿病学会制定的诊断标准［2，3］。30份正常对照血清取自献血者。常规检查采用德国的间接免疫荧光试剂盒及国内IBT检测试剂盒。 　　二、方法 　　1.SSA-60000抗原的基因克隆与序列测定：以标准抗SSA-60000血清为免疫探针，采用噬斑原位印迹法，筛选人肝λgt11cDNA文库，挑取表达SSA-60000融合蛋白的阳性克隆。通过DNA测序鉴定SSA-60000cDNA［4］。 　　2.构建表达型SSA-60000重组菌：经PCR扩增，将SSA-60000cDNA经BamHI和EcoRI双酶切后定向插入PGEX-2T质粒，经CaCl2法转导入宿主菌JM109