改良吸收放散试验证明异种弱血型抗原.doc

PAGE PAGE 1 改良吸收放散试验证明异种弱血型抗原 抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集可致敏，但这种结合实际是可逆的，如改变某些物理条件时抗体又从结合的红细胞上解脱下来［1］。传统的吸收放散试验作为一种证明弱血型抗原的检测方法已被广大血型工作者广泛运用于实际工作中，但无论是证明A、B亚型还是证明弱D抗原，都是用于同种抗原的鉴定。 　　本文所报告的改良吸收放散试验是在传统方法的基础之上，利用猕猴红细胞放散液与人A、B红细胞反应，避开了人抗猴种属抗体的干扰，达到了证明异种弱抗原的目的，为血型工作者今后开展相关研究打开了思路。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1标本30份猕猴血样采自广州华南灵长类研究中心，后肢静脉采血，肝素抗凝。 　　1.1.2试剂人源ABO抗血清由河北省血液中心提供。本实验室按操作规程［2］进行筛选、鉴定、加工为猕猴ABO血型检定专用试剂。 　　1.2方法 　　1.2.1盐水凝集试验分别用商品McAb-A、McAb-B试剂与商品人源抗-A、抗-B试剂与猕猴红细胞进行直接凝集试验。 　　1.2.2改良吸收放散试验（1）取2支试管，各加猕猴压积红细胞1ml，以生理盐水洗涤3次，最后一次洗涤后，弃上清液；（2）于每管压积红细胞中分别加入2ml猕猴专用抗-A/抗-B；（3）充分混匀，室温中孵育1h，过程中不时轻摇试管；（4）离心后洗涤5次，将压积红细胞重悬于0.5ml生理盐水；（5）56℃水浴箱中放散20min，每2~3min摇晃一次；（6）1500rpm离心1min，上清即为放散液；（7）各取200μl放散液移入2支干净试管内，分别加入2%人A、B型红细胞各200μl，混匀；（8）1500rpm离心15s；（9）肉眼和显微镜下观察试验结果。 　　2结果 　　2.1盐水凝集试验商品McAb-A和McAb-B试剂与猴红细胞均无凝集反应，而对照组呈现正常凝集；商品人源抗-A、抗-B试剂与所有猴红细胞均呈凝集反应。 　　2.2改良吸收放散试验从30只猕猴血液样本中检出类人A型3只（10%）、B型9只（30%）、AB型3只（10%），详细结果见表1。 　　表1猕猴红细胞放散液与人试剂红细胞的凝集反应结果（略） 　　注：1+~4+：凝集的程度；-：未检出 　　3讨论 　　1981年，Terao等［3］对日本猕猴的ABO血型研究结果表明，日本猕猴的红细胞上存在类人ABO血型抗原，且受ABO血型基因调节。宋怀燕等［4］1995年报道了我国猕猴ABO血型的调查结果，证明我国猕猴的唾液中含有ABH血型物质，但用直接凝集试验无法检测出红细胞上的类人ABO血型。本实验也表明，商品McAb-A、-B试剂无法检测猕猴红细胞膜上的类人ABO抗原，符合宋怀燕的报道；而商品人源抗-A、抗-B试剂则与所有受检猕猴红细胞呈凝集反应。经反复实验分析，排除冷凝集素等因素，确定是由于异种间的种属抗体所致。 　　为了证明猕猴红细胞上的类人A、B抗原，笔者设计了改良吸收放散试验：先用待测的猕猴红细胞与专用抗-A/-B反应，此时抗血清中的ABO血型抗体及种属抗体均被吸收到猕猴红细胞上。在56℃水浴条件下将吸附的抗体放散下来（包括ABO抗体和人抗猴种属抗体），以放散液分别与人的A、B型红细胞反应，此时放散液中的ABO抗体与人红细胞发生反应凝集而种属抗体（人抗猴抗体）不会与人红细胞发生凝集，由此推断出猕猴红细胞上有类人A/B或AB血型抗原。这一巧妙设计避开了种属抗体对猕猴类人ABO血型鉴定的干扰，成功地检定出猕猴红细胞上的类人ABO血型，不仅为广大血型工作者今后开展相关研究打开了思路，而且首次证明出我国猕猴红细胞上具有类人ABO血型抗原，为建立灵长类动物输血动物模型提供了基础资料。 　　另外，由于猕猴红细胞表面的类人ABO抗原很弱，当专用血清的抗-A/抗-B效价分别为64或128时，结果不稳定；当抗-A/抗-B效价低于64时结果失败，说明高效价、高特异性、高亲和力的人源ABO抗血清是本技术成败的关键。本实验中部分猕猴类人ABO血型未检出考虑为这些红细胞上的类人ABO抗原太弱所致。 　　［参考文献］ 　　1李勇，杨贵珍.人类红细胞血型学理论与实验技术.北京：中国科学技术出版社，1999，267-273. 　　2中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程，第2版.南京：东南大学出版社，1997，91-92. 　　3TeraoK,FujimotoK,ChoF,etal.DetectionofABOgroup-Specificsubstancesontheredcellsofthecynomolgusmonkey.JapanJMedSciBiol,1981,34（1）:1-7. 　　4宋怀燕，刘雅诚，高富愿，等.恒河猴（Macacamul