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- 2019-03-17 发布于四川
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- | 2018-09-17 颁布
- | 2019-04-01 实施
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ICS 07.080
C 27
国
中华人民共和国国家标准
GB/T 36757-2018
M-MLV 反转录酶
M-岛1LV reverse transcriptase
2018-09-17 发布 2019-04-01 实施
国家市场监督管理总局峪非
中国国家标准化管理委员会 0(.. 'I (J
GB/ T 36757-2018
目 次
皿
引言 ……………………………………………………………………………………………… .. . ]_~「
1 范围 -
2 规范性引用文件 -
3 术语和定义 ·
4 技术要求 -
5 检验方法 …·
6 包装、运输及贮存………………………………………………………………………………………… 2
7 保质期 ……………………………………………………………………………………………·… 2
附录A (规范性附录) M-MLV 反转录隅隅活力检测
附录B (规范性附录) 核酸外切陪检测
附录c (规范性附录) 核酸内t1J 陌检测
I
GB/ T 36757-20 18
附 录 B
(规范性附录)
核酸外切酶检测
B.1 原理
由于BamH I 切开DNA 双链产生一对勃性末端,其各有 5 个碱基失去互补碱基形成突内单链,它
易受核酸外切酶作用丢失若干个碱基乃至形成平末端;如果将此DNA 连接后再用 BamH I 酶切,结果
是无法切开。 如果该位点是在外显子区或编码区,即意味其对应的氨基酸序列发生变化,乃至某些生物
性状发生改变。 例如质粒pBR322 所含BamH I 识别位点是在其抗匹|环素基因上,如果使用被核酸外
切酶污染的样品 BamH I 过量长时程切荆 pBR322 ,然后再连接闭环后重新转化受体菌,该菌在含四环
素培养基上无法生长,而没有这样陪切的 pBR322 转化菌能够生长。 又如质粒 pUC19 所含BamH I 位
点居于编码 Lac Z 的 α 互补肤上,若发生前述状况, 就会导致该肤链的氨基酸序列变化,最终在含异丙
半乳糖节’ (IPTG)和冉半乳糖节酶的 LB 培养基土由原本是蓝斑变成向斑。 如果向斑数目占到
基硫代
总菌斑数的10 %以上,就判定该样品已有核酸外切酶污染。
B.2 仪器和设备
B. 2. 1 恒泪水浴槽。
B.2.2 台式离心机。
B.2.3 届净丁,作台。
B. 2.4 恒泪培养箱。
B. 3 材料
B. 3. 1 高纯 CCC pUC19 DNA。
B. 3.2 T 4 DNA 连接隅。
B. 3.3 10 × T 4 DNA 连接陌缓冲液: 500 mmol/L Tri日’HCl 缓冲液(pH7. 肘, 100 mmo l/L Mgz+ ,
10 mmol/L AT P, 100 mmo l/L DTTO
B.3.4 LB 培养液。
B. 3.5 氯仿-异戊醇( 24
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