遗传性出血病的临床检测和基因诊断王鸿利.ppt

遗传性出血病临床检测和基因诊断 上海交通大学医学院附属瑞金医院 王鸿利 2007.4 研究对象 技术平台 建立技术平台 临床表现→家系调查 表型检测 基因诊断 突变基因的功能研究 携带者和产前诊断 临床表现 以广泛出血为临床特征 血友病的出血特征 大关节 肌肉 皮肤 粘膜 内脏 创伤 手术 临床表现 以广泛出血为临床特征 其他出血病的出血特征： 皮肤瘀斑 粘膜（鼻、口腔）出血 月经过多，持续时间长 内脏出血 创伤出血/手术出血难止 家系调查 家系调查 常染色体隐性遗传（AR) 家系调查 常染色体显性遗传(AD) 表型检测－VWD的检测 VWD实验诊断和分型流程 例如血友病A-内含子22倒位（占47－48％） 血友病A－其他突变的检测 血友病A-非内含子22/内含子1倒位 间接连锁分析：9个多态性位点 直接基因测序 例如：遗传性凝血因子VII缺陷症 国际首次报道的基因突变 vWF基因大片段缺失致病的分子基础 vWF基因大片段缺失致病的分子基础 vWF大片断缺失致病的分子基础  血友病携带者和产前诊断 血友病A间接连锁分析 血友病A间接连锁分析 血友病A/B携带者和产前诊断结果 血友病A/B携带者和产前诊断结果 F8C F8Civs13 G6PD DXS9901 DXS15 DXS1108 DXS1073 DXS52 F8Civs22 BclI 性别基因位点 联合9个多态性位点及性别基因位点，累积识别能力99.6% 建立7重荧光PCR技术 诊断率和准确率均为100％ 欧美国家利用F9基因内的6个多态性位点，可对89％的血友病B作出诊断（Br J Haemato1 1993．84：101-105) 亚洲人这些位点的诊断信息几乎为0（Hum Hered. 1992;42(3):204-5） 血友病B间接连锁分析 寻找杂合度较高的F9基因外的6个STR位点，累积识别能力为99.99％ 本项目的诊断率和准确率均为100％ 血友病B间接连锁分析 DXS1192 DXS1211 DXS102 DXS8013 F9 DXS1227 DXS8094 100 100 100 产前诊断随访准确率（％） 64（85.3） 8（100） 56（83） 产前诊断随访例数（％） 75 8 67 产前诊断 141 20 121 携带者诊断 合 计 血 友 病 B（例） 血 友 病 A（例） 项 目 目前，以4～6个家系/月，接收来自全国及海外的血友病携带者和产前诊断 时瑞杰 基因诊断 FISH PCR 正确的基因诊断 遗传咨询 植入正常的胚胎 取1-2单卵裂球 血友病单细胞植入前诊断 辅助生殖中心 基因诊断中心 谢 谢! Your company slogan LOGO 表1 遗传性出血病的研究 家系资料 实验表型 基因诊断 临床资料 体外表达研究 临床诊断 临床治疗 诊断和治疗流程 性连锁隐性遗传 例如血友病A/B等 例如FII、V、VII、X、XI、XII、XIII缺乏症等 例如，毛细血管扩张症、异常纤维蛋白原血症、部分VWD 表型诊断－一期止血缺陷 筛选试验 表型检测－一期止血缺陷 诊断试验 表型诊断－二期止血 筛选试验 表型诊断－二期止血 诊断试验 RIPA VWF:CB VWF:FVIIIB 多聚体 VWF:Ag VWF:Rco VWF:A FVIII:C PLT BT APTT PT 分型试验 诊断试验 筛选试验 在人类基因库中寻找相关的基因序列 PCR扩增 PCR产物的纯化 RFLP 基因诊断 直接测序 TA克隆 RT-PCR、AS-PCR、Realtime PCR 技术平台－遗传性出血病的基因诊断 血友病A-内含子1倒位 F7基因图 0.84 59 14.3 姑姑 0.7～1.0 85～120 11～13 参考值 0.81 55 14.3 大伯 0.58 36 14.3 母亲 0.64 34 16.8 父亲 0.73 28 17.2 祖母 0.79 48 16.6 祖父 0.41 1 35.2 先证者 FVII：Ag(mg/L) FVII：C（%） PT（s） 家系成员 Arg304Trp normal 10966-8delC 剪接位点 催化区