基于适体技术化学发光检测生物小分子腺苷-化学工艺专业论文.docxVIP

摘 摘 要 万方数据 万方数据 摘 要 本论文是基于适体技术化学发光检测生物小分子腺苷的研究，主要以腺苷 为研究对象，羧基修饰的磁性微球作为分离载体，通过氨羧反应将适体连接于 磁性微球上，再通过碱基配对原则连接上报告序列，由于配体腺苷的竞争作用， 导致连接于磁性微球上的化学发光物质减少，信号减弱，从而间接实现腺苷的 检测。论文通过实验构建了三种检测方法，具体实验方法如下: 第一种检测方法是使用辣根过氧化物酶化学发光体系检测。实验优化了羧 基修饰的磁性微球、氨基适体、和链霉亲和素修饰辣根过氧化物酶的量、考察 了尿苷、胞苷及鸟苷对腺苷适体的选择性。结果发现腺苷浓度在 1×10-9 mol/L～ 10?4 mol/L 范围内，化学发光信号和腺苷浓度线性关系良好，腺苷的最低检测浓 度达到 1pmol/L；并对实际尿样也进行了检测和回收率实验，结果表明该法具有 一定的可行性； 第二种检测方法采用液溴-金纳米粒子化学发光体系检测，建立了基于适体- 金纳米粒子化学发光检测腺苷的新技术，实验优化了羧基修饰的磁性微球、氨 基适体、报告序列和金纳米粒子标记链霉亲和素金的量，最后在进行了选择性 实验后对实际尿样中的腺苷进行了检测，此外论文中的金纳米粒子是通过柠檬 酸钠还原氯金酸制备的，通过螯合反应制备链霉亲和素标记金纳米粒子。实现 化学发光间接检测生物小分子腺苷； 第三种检测方法是在上部分研究的基础上，建立了金纳米粒子经羟胺-氯金 酸体系放大，使鲁米诺化学发光体系发光的催化能力显著增大，从而达到提高 灵敏度的作用。同样对实验中所需反应条件进行了优化考察和选择性实验。同 时在最优实验条件下实现了对腺苷的检测，其最低检测限高达到了 100 fmol/L； 并通过特异性实验、回收率实验证明这一检测方法的选择性良好，稳定性和重 复性都符合要求。也实现了肿瘤患者实际尿样中腺苷的检测，获得满意结果。 因此本方法操作简单、灵敏度高有望为临床诊断疾病提供有利分析数据。 关键词：腺苷；适体；金纳米粒子；化学发光 I AB ABSTRACT ABSTRACT This paper report a detection of biological small molecule adenoisine which based on aptamer chemiluminescence(CL), the object of the research is adenosine, carboxyl modified magnetic microspheres as separate carrier. Aptamer connected to magnetic microsphere through aminoxatyl reaction, then report the sequence through base-pairing principle. Due to the effect of competition of the adenosine, leading the decrease of CL matter which connected to magnetic microspheres, causing the weaken of signal. Thus indirectly achieve the detection of adenosine. These experiments construct three detection methods, which shows below: The first detection method is using a horseradish peroxidase chemiluminescence detection system. The experiment optimize the amount of carboxyl-modified magnetic microspheres, aptamers, and streptavidin -modified horseradish peroxidase and also investigate the selective of the uridine, cytidine and guanosine to adenosine aptamer. The results shows good linear relationship between the concentration of adenosine in the 1×10-9mol/L ~ 10-4 mol/L as well as the good performance of chemiluminescent