广叶绣球菌溶血素基因的序列分析探究及表达动态.pdfVIP

食用菌学报⑥2016．23(4)：7～13 DOI：10．16488／j．cnki．1005—9873．2016．04．002 广叶绣球菌溶血素基因的序列分析及表达动态 肖冬来，马璐，应正河，江晓凌，林衍铨。 (福建省农业科学院食用菌研究所，福建福州350014) 摘要：通过转录组测序获得了一个广叶绣球菌(Sparassis 物信息学分析，并利用实时定量PCR分析溶血素基因表达水平，采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric forrelativeandabsolute tags 异。结果表明latifolysin基因全长为399bp，编码133个氨基酸。保守功能域搜索显示latifolysin具有与杨树 菇溶血素(aegerolysins)蛋白家族相同的结构域和功能位点，两者序列相似性40％。杨树菇溶血素家族蛋白在 真菌中呈不连续性分布。系统进化树结果显示绣球菌溶血素隶属于担子菌类群，与草菇(Volvariella 期表达量最高，且显著高于菌丝体中表达水平。 关键词：绣球菌；杨树菇溶血素；溶血素；实时定量PCR toxin)，其与细胞膜上的配体结 溶血素(hemolysin)是一类外毒素，属于穿孔毒素(pore—forming 合，破坏寄主细胞结构，造成功能的紊乱以致细胞死亡[1]。目前，细菌溶血素研究较多，而关于真菌 点，富含芳香族氨基酸和酸性氨基酸[2]。曲霉(Aspergillusfumigatus)中分离获得的溶血素蛋白 (Agrocybeaegerita)中分离纯化获得杨树菇溶血素蛋白，该溶血素基因在原基和子实体中特异性表 达口]。在食药用菌中，该家族蛋白研究的还很少，除杨树菇外，目前仅有刺芹侧耳(Pleurotus eryngii) 子实体成熟早期达到最高峰，且在担子和担孢子中含量较高∞。0。。基因eryngolysin同样在原基形成 起始阶段特异性表达，在子实体成熟早期达到最高峰凹]。ostreolysin在体外还可以诱导原基的形成 中表达水平[12。。因此，推测杨树菇溶血素蛋白家族可能在子食用菌原基和子实体形成过程中发挥 重要作用。 广叶绣球菌(Sparassis 种珍稀食药用真菌口3I。广叶绣球菌的研究，目前主要集中于生物学特性、栽培、葡聚糖及其活性等方 面口4|，缺乏子实体发育分子机理的研究。为此，笔者实验室在完成了广叶绣球菌菌丝体转录组测序 征，实时荧光定量PCR分析溶血素基因在绣球菌不同生长阶段的表达。 收稿日期：2016—05—06原稿；2016—07—22修改稿 基金项目：福建省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1020一1)和福建省种业创新与产业化工程项目 (2014S1477-8)资助 作者简介：肖冬来(1981～)，男，博士，助理研究员，主要从事食用菌栽培生理研究。 ”本文通讯作者E-mail：lyq一406@163．com 万方数据 食用菌学报 第23卷 1材料与方法 1．1供试菌株 广叶绣球菌(S．1atifolia)“闽绣1号”菌株为福建省农业科学院食用菌研究所保藏。 1．2分析样品制备 将直径约4mm的斜面菌种接种于PDA平板上，25℃活化培养20d。取直径约7mm的活化菌 mL 丝块3块，接种于装有100PD培养基的250mL三角瓶中，25℃振荡培养25d后收集菌丝体 样品。 广叶绣球菌在实验菇房内进行常规栽培管理口5。。分别于接种后培养60、80和115d时取原基、幼 菇和成熟子实体样品，所有样品经液氮速冻后置于一70℃保藏，备用。 1．3生物信息学分析 序列翻译获得该蛋白的氨基酸序列。将广叶绣球菌溶血素的氨基酸序列提交到NCBI进行比对， Conserved 列口]，人工分析获得真菌基因组数据库中收录的物种杨树菇溶血素家族蛋白，用于分析杨树菇溶血素 家族蛋白在真菌中的分布(搜索时间2015年10月26日)并从中选取有研究报道的杨树菇、猪苓、可可