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NAA increased to 5.0 mg. l-1 Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus No MS salts No sign of regeneration from explant at all.? MS salts reduced to 0.47 g. l-1 ? Some root growth but reduced development of shoots MS salts increased to 9.52 g. l-1 ? Shoots developed on upper surface of explant. No roots or callus. 二、相关知识 植物细胞的全能性 植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性,在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 差异:(1) 受精卵的全能性最高 (2) 受精卵分化后的细胞中,体细胞的全能性比生殖细胞的低。 潜在全能性的原因:基因表达的选择性 科学研究表明,处于离体状态的植物活细胞,在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下,就可能表现出全能性,发育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程,就是植物组织培养。 三、实验原理 植物细胞全能性的表达 脱分化(dedifferentiation):将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来,恢复细胞的分裂活性。 再分化(redifferentiation):经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。 三、实验原理 四、试剂和器材 1、材料 新鲜胡萝卜茎 2、试剂 MS培养基 10%亚硫酸溶液 MS培养基配制方法 四、试剂和器材 四、试剂和器材 3、仪器 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱 4、玻璃器皿 试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、 刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿 5、用具 镊子、解剖刀、接种针、记号笔、封口膜 离体的植物器官、组织、细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根 芽 植物体 五、操作步骤 五、操作步骤 切开胡萝卜,在圆圈处取一块组织 P-木质部、C-形成层、X-韧皮部 五、操作步骤 形成层开始形成愈伤组织 C1-愈伤组织、C2-形成层 五、操作步骤 3-4周后完全形成愈伤组织状态(脱分化) 组织块失去色素 五、操作步骤 把脱分化后的愈伤组织转移到培养基上 * * * * * * * * 植物组织培养技术 一、实验目的 二、相关知识 三、实验原理 四、试剂和器材 五、操作步骤 六、思考题 目 录 一、实验目的 掌握植物组织培养相关理论知识 掌握植物组织培养的操作方法 了解不同激素及其比例对愈伤组织再分化的作用 二、相关知识 离体(in vitro)条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整植株的过程。 1958年,英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养,成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株,不但使细胞全能性理论得到证实,而且为组织培养的技术程序奠定了基础。 应用领域 1、快速繁殖 运用组织培养的途径,一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例如一株兰花一年繁殖到400万株。 2、种苗脱毒 针对病毒对农作物造成的严重危害,通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗。 3、远缘杂交 利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功,从而育成一些罕见的新物种。 二、相关知识 应用领域 4、突变育种 采用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。 5、基因工程 基因工程主要研究DNA的转导,而基因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生。 6、生物制品 有些极其昂贵的生物制品,如抗癌首选药物--紫杉醇等,可通过组织培养方式生产。 二、相关知识 植物组织培养的分类 广义的组织培养依外植体不同,可分为: 1) 器官培养(organ culture) 2)茎尖分生组织培养(shoot tip culture, apical meristem culture) 3)愈伤组织培养(calluse cultrue) 4)细胞培养(cell culture) 5)原生质体培养(protoplast cult
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